摘要:一、结晶紫检测法 1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104 ~104 WEHI-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),37℃ 5% CO2 的二氧化碳培养箱中培养2~3小时,让细胞帖壁。2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀[阅读全文:]
摘要:1、ATP反应液(Bio-Orbit)是粉末状混合物,含有荧光素、荧光素酶、0.5mmol醋酸镁、50mg BSA和0.1μmol无机焦磷酸。在4℃可以保存1个月。用前用10ml含2mmol/L EDTA的0.1mol/L pH7.75 Tris-醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在-2[阅读全文:]
摘要:1、如果靶细胞是帖壁细胞,在细胞因子作用适当时间后,用生理盐水洗去死亡细胞,用0.25%胰蛋白酶液消化细胞。加适量生理盐水吹打,使细胞分散成单个细胞。直接在血细胞计数板上计数细胞。2、如果靶细胞是悬浮细胞,则需要用染[阅读全文:]
摘要:一、原理 细胞融合(Cell fusion),即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合,在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种[阅读全文:]
摘要:按细胞比重分离B细胞1.将2~3ml含3×107纯化的B细胞(B细胞>90%)的细胞悬液加到3ml Percoll溶液(比重1.074)上,水平离心1000×g 20分钟。2.吸去无细胞上清液,交界面的低密度B细胞和大部分Percoll溶液。由于此时[阅读全文:]
摘要:用尼龙毛法分离B细胞一、尼龙毛柱的制备1.取直接3D,长度约10cm的尼龙毛,用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl,置37℃烘干备用。2.称取50mg尼龙毛,均匀分散,置Hanks液中浸泡。取1ml注射器,出口接塑料管并夹住。将尼[阅读全文:]
摘要:研究T细胞产生的细胞因子的方法1、研究细胞因子mRNA的方法绝大多数细胞因子mRNA在T细胞中只短暂存在,其存在的量与T细胞产生细胞因子的量也有很好的相关性。所以,在大多数情况下,细胞内mRNA的量可以反映细胞产生细胞因[阅读全文:]
摘要:T细胞亚群的分离分离T细胞亚群,包括各种CD抗原阳性的亚群、αβ型T细胞受体阳性的T细胞或γδ型T细胞、或者其它表面标志不同的T细胞亚群,通常需要有相应的特异性抗体。用直接或间接免疫荧光染色,通[阅读全文:]