摘要:Reagents Agarose, UltrapureAmpli Taq polymerase 5 U/µlBuffer, 10X and 25 mM MgCl 2Loading buffer, 5XEthidium BromidePrimer “UN1”10X TAE bufferTemplate DNAUse 400 – 600 ng for e[阅读全文:]
摘要:Reagents Avidin-Cy5 (1.8 mg/ml)Bovine Serum Albumin (BSA)DAPIFormamideHCl, 1 NMouse anti-digoxigenin (0.1 mg/ml)Sheep anti-mouse Cy5.5 (1.0mg/ml)SSC, 20XTween 20dH2O 详细操作流程请点击下面的链接下载:S[阅读全文:]
摘要:步骤:1、从棉签上取下有检材的棉花并置于1.5塑料离心管中。2、管中加入400微升TNE缓冲液;25%微升sarcosyl(硅鱼精);75微升水;5微升蛋白酶K溶液手混匀,37度保温2小时。 3、用一新的灭菌牙签将棉花拧干后管中取出,再用12000r[阅读全文:]
摘要:λ噬菌体是最早使用的克隆载体,λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子,它在宿主细胞有两种生活途径,其一是裂解生长,环状DNA分子在细胞内多次复制,合成大量噬菌体基因产物,装配成噬菌体颗粒,裂[阅读全文:]
摘要:一、实验原理果蝇(fruit fly)是双翅目(Diptera)昆虫,属果蝇属(genus Drosophila),约有2500个种。通常用作遗传学实验材料的是黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)。用果蝇作为实验材料有许多优点: 1. 饲养容易。在常温下,[阅读全文:]
摘要:采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单,但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不同,[阅读全文:]
摘要:当我们已经获得目的基因片段,选择好适当的克隆(或表达,转化)质粒载体, 并确定重组方案后,下面要进行的就是DNA片段之间的体外连接,从而获得重组子。 此重组子可转入相应的宿主菌中用于对目的基因的扩增以及目的基因表[阅读全文:]
摘要:1、 连接缓冲液的影响:大体上缓冲液含有以下组分:20-100mmol/L的Tris-HCl,较多用50mmol/L,pH的范围在7.4-7.8,较多用7.8,目的是提供合适酸碱度的连接体系;10mmol/L的MgCl2,作用是激活酶反应;1-20mmol/L的DTT,较多用10m[阅读全文:]