摘要:问:想从酵母提取质粒,转化大肠杆菌,按分子克隆的方法,可能都线性化了,转化率为0,请问有什么好的办法?答:以下是我的方法,曾提过数百个,好像转化效率还可以,基本上都提出来了。个人体会是Lyticase的活性要好,而且涡流混[阅读全文:]
摘要:问:我要表达的多肽是4kd大小,该蛋白是一种抗菌肽.我用的载体是pPIC9,是分泌表达的。先简单说下我前期的工作:首先我用GS115就做了一次电转化后,MD板长了几个克隆,菌落PCR鉴定阳性率约为20%。然后进一步诱导,先挑单菌落[阅读全文:]
摘要:问:请问大家提取酵母的总RNA都用什么方法?有好用的试剂盒吗?酵母总RNA提取应该注意什么?答:使用热酚法抽提酵母RNA,很好用,至今没有失败过。(1)将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中,30℃过夜旋转培养。(2)稀释过夜培养的[阅读全文:]
摘要:Materials: Sterile LB medium (Luria-Bertani Medium) with or without antibiotic: water 500 ml bacto-tryptone 10 g bacto-yeast extracts 5 g sodium chloride 10 g stir to dissolve pH to 7.0 autoclave to s[阅读全文:]
摘要:问:我电转化的酵母抽基因组后做PCR鉴定,本就有颜色筛选的,应该成功率很大的啊,可是我鉴定了无数个克隆,就是拉不出PCR来。难道抽基因组的方法很关键吗?有的文献甚至用菌落做PCR,是不是骗人的啊? 我是用蜗牛酶(鼎国)破[阅读全文:]
摘要:经过不断的努力,终于得到酵母表达阳性结果。特把表达的一些心得写下来,希望对正在努力中的XDJM有所帮助,也以此感谢生命经纬对我的帮助。分泌型载体:pPICZaC 宿主菌:X33 培养基:BMGY/BMMY 目的蛋白:20KD1、表达过程中防[阅读全文:]
摘要:生命经纬网友ljksbs:1、细菌保存于穿刺培养物中:一般细菌保存于穿刺培养物可以维持两年。具体方法如下:用灭菌接种针挑取分散良好的单菌落,针缓慢穿过琼脂到达瓶底,连续几次,盖上瓶盖拧紧,做好标记。室温下存放于暗处。([阅读全文:]
摘要:目前常用的药敏试验方法如下:1、定性测定的纸片扩散法(disk diffusion test),K-B法: WHO推荐的全球统一的标准方法。原理:含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上,纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后[阅读全文:]