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分子克隆常用技术
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
标签: 分子克隆

摘要:一、核酸的纯化在分子克隆 的所有操作中,最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质,通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆 有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时,可进行这种抽提。然[阅读全文:]

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PCR扩增产物的电泳分析
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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摘要:凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。 一、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度,把琼脂糖分为[阅读全文:]

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Restriction?Digests?of?Genomic?DNA
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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Restriction?Enzyme?Buffer
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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摘要:Restriction Enzyme Buffer Most enzymes can use REact buffers; however, some are made up separately. Use fresh Milli-Q water , siliconized or sterile glassware or disposable plastic ware to make the fo[阅读全文:]

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酶切反应建议
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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摘要:一、 建立一个标准的酶切反应目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个50μl的反应体系中,1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1&[阅读全文:]

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DNA序列测定技术
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
标签: DNA序列

摘要:序列测定的技术和策略Sanger双脱氧链终止法Maxam-Gilbert DNA 化学降解法测序策略目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977)提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭,但这两种方[阅读全文:]

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DNA?Sequential?Digestion
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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Preparation?of?Nested?Deletions
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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摘要:Preparation of Nested Deletions Procedure:1) Need to cut 10 µg of plasmid in two spots ('A' and 'B') in polylinker. 'A'cut is 'ith a restriction enzyme which gives a 3' recessed end (exonuclease[阅读全文:]

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CLONING?FROM?LOW?MELT?AGAROSE
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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摘要:competent cells (DH5alpha at competency of 108 cfu/µl of pUC18). The transformation procedure it self is very similar to a standard CaCl2 transformation. Place 100 µl of TB buffer in a tub[阅读全文:]

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Subtractive?Cloning
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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DNA技术