摘要:一、 DNA 酶切反应 1、将清洁干燥并经灭菌的eppendorf管(最好0.5ml)编号,用微量移液枪分别加入DNA 1μg和相应的限制性内切酶反应10×缓冲液2μl,再加入重蒸水使总体积为19μl,将管内溶液混匀后加入1μl酶[阅读全文:]
摘要:T-RFLP的主要原理与步骤大体如下:1.提取DNA;2.设计1-2对通用引物(主要根据16SrRNA基因)进行PCR扩增,(每对引物的1条5'端标记荧光);3.产物纯化后,酶切.每组酶切产物中只有一条片段末端标记了荧光。4.酶切产物通过毛细管[阅读全文:]
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摘要:30多年前,当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时,首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵,而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制[阅读全文:]
摘要:Restriction enzyme digestions are performed by incubating double-stranded DNA molecules with an appropriate amount of restriction enzyme, in its respective buffer as recommended by the supplier, and a[阅读全文:]
摘要:在分子生物学研究中,DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert(1977)发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大,但都[阅读全文:]
摘要:T-RFLP中文可翻译为:末端限制性片段长度多样性,又可以称为16sRNA基因的末端限制性片段分析技术。是一种新兴的研究微生物多态性的分子生物学方法,日亦受到研究人员的重视。该技术已经成功应用于各种微生物群落的分析比[阅读全文:]
摘要:Hahn Lab,The Fred Hutchinson Cancer Research Center and Howard Hughes Medical Institutehttp://www.fhcrc.org/science/labs/hahn/methods/mol_bio_meth/Big%20Dye%20Protocol.pdf [阅读全文:]