摘要:实验原理聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）技术是在PCR技术基础上发展起来的，它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变[阅读全文:]
摘要:聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称ＰＣＲ，是一项在短时间内大量扩增特定的ＤＮＡ片段的分子生物学技术。开发史这项技术的发明人是Kary Mullis.１９８３年，在一家生物高技术公司（Ｃｅｔｕｓ）工作的Mullis着手解决用简单的[阅读全文:]
摘要:随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现。尤其是pCR技术问世以后，各种与pCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展。如不对称pCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage[阅读全文:]
摘要:PCR是DNA的聚合酶链式反应，SSCP 是单链构象多态性。SSCP一般都要采用PCR扩增的方法进行检测，故名PCR-SSCP。此项技术的原理是，不同序列组成的单链DNA或RNA在非变性聚丙烯散胶凝胶中电泳，会因其空间构象不同表现出不同的[阅读全文:]
摘要:Possible Causes: Components 可能原因之一——反应组分· Primer concentration is too high.· Primer degeneracy is too high.· Nested primers are required.· New primers[阅读全文:]
摘要:一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有1、模板核酸的制备2、引物的质量与特异性3、酶的质量及4、PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析[阅读全文:]
摘要:PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3&[阅读全文:]
摘要:Possible Causes: Components· Primer concentration is too low.· Primer concentrations not balanced. Make sure primers are present in equal concentrations.· New primers are required[阅读全文:]