摘要:Labelling PCR Products with DigoxigeninPCR products may be very conveniently labelled with digoxigenin-11-dUTP (Boehringer-Mannheim) by incorporating the reagent to 10-35% final effective dTTP concent[阅读全文:]
摘要:1、导论多聚酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是美国Perkin-Elmer/Cetus公司人类遗传研究室Mullis K. B.等人于1985年发明的一种快速体外DNA片段扩增技术，是八十年代分子生物学资源领域的一项革命性突破，被[阅读全文:]
摘要:Recommended Reagent Concentrations:Primers: 0.2 - 1.0 uMNucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTPDimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v)Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxnTarget DNA: 1 ng - 1 ug (NB: [阅读全文:]
摘要:1、问题：RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。可能原因：1）RNA被降解 建议解决方法：在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA；在将组织从动物体取出后立刻处理在100％[阅读全文:]
摘要:PCR (Polymerase chain reaction) 是用一对寡聚DNA作为引物，通过加温变性－退火－DNA合成这一周期的多次循环，使目的DNA片段得到扩增。由于这种扩增产物是以指数形式积累的，经25－30个循环后，扩增倍数可达106。Dr. Karry M[阅读全文:]
摘要:PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力。近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多[阅读全文:]
摘要:一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性：通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大小。Pfu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将[阅读全文:]
摘要:PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提[阅读全文:]
摘要:Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的。yT是一种嗜热真菌，能在70～75℃生长。该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。(一)酶活性与热稳定性该酶基因全长2496个碱基，编码832个[阅读全文:]
摘要:凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。一、琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分[阅读全文:]