摘要:DNAMAN是一种常用的核酸序列分析软件。由于它功能强大,使用方便,已成为普遍使用的DNA序列分析工具。以DNAMAN 5.2.9 Demo version为例,简单介绍其使用方法。[阅读全文:]
摘要:所谓的实时荧光定量 PCR 就是通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断[阅读全文:]
摘要:PCR扩增产物的大小是由特异引物限定的,因此引物的设计与合成对PCR的成功与否有着决定性的意义。 [阅读全文:]
摘要:自从1985年美国PE-Cetus公司的人类遗传研究室 Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应(PCP0 以来,PCR已经成为了分子生物学领域最基本也是最重要的技术手段之一[1]。然而能否找到一对合适的核苷酸片段作为引物,使[阅读全文:]
摘要:1、简介寡聚核苷酸引物的选择,通常是整个扩增反应成功的关键。所选的引物序列将决定PCR产物的大小、位置、以及扩增区域的Tm值这个和扩增物产量有关的重要物理参数。好的引物设计可以避免背景和非特异产物的产生,甚至在RNA[阅读全文:]
摘要:我们做实验,有时会用到别人已经用过的引物,但如何才能知道这个引物是否正确呢?我通常利用prime 5.0来验证引物。下面我用常用的内参GAPDH将验证过程介绍如下:GAPDH的引物序列来自一片外文文献:上游:AATGCATCCTGCACCACC[阅读全文:]
摘要:在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5,点击File-New-DNA sequence,出现输入序列窗口,Copy目的序[阅读全文:]
摘要:1. 引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成的原理都相同,主要差别在于合成产率的高低,试剂消耗量的不同和单个循环用时[阅读全文:]