问:请问各位前辈,肝血窦内皮细胞的分离需要经过差速离心,第一步去除大部分肝细胞,第二步得非实质沉淀。很多文献报道都是使用“转数”的说法,但我觉得应该是“离心力”才对,我的想法正确吗?如果是,到底每步应是多大的离心力啊?而且不同的离心机可能半径也不同吧,那具体转数需要自己计算哦?恳请赐教。 答:应该是离心力比较准确,因为对于不同离心机或不同转子,相同离心力转数可能不同。第一步很多文献都说用50g 2min甚至40秒,但本人经验这个离心力根本无法把肝实质细胞离心下来。我一般用100g十分钟。非实质细胞用350g十分钟,你可以试一试并根据你的试验情况加以改进。 答:RCF=mw2r/mg=w2r/g。所以RCF与RPM的转换公式如下:RCF=(2 X 3.14 X n / 60 )2 X R / 9.8= 1.117868 X 10-3 X n2 X R 我们的离心机半径是142mm的, 如果RCF是50G的话,大概是561RPM,而我只用500rpm, 2min来离肝实质细胞的,完全可以. |
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