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实验室常用缓冲液汇总

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1、1M Tris-HCl    (pH7.4,7.6,8.0)     

□组份浓度 1 M Tris-HCl 

□配制量 1L 

□配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
                         2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                         3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
                                                        pH值                      浓HCl
                                                        7.4                         约70mL
                                                        7.6                         约60mL
                                                        8.0                         约42mL
                        4. 将溶解定容至1L。
                       5. 高温高压灭菌后,室温保存。                          
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5 M Tris-HCl   (pH8.8)  

□组份浓度 1.5 M Tris-HCl 

□配制量 1L 

□配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
                           2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。
                           3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
                            4. 将溶液定容至1L。
                          5. 高温高压灭菌后,室温保存。 
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TE Buffer   (pH 7.4,7.6,8.0)  

□组份浓度 100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA 

□配制量 1L 

□配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
                              1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4,7.6,8.0) 100mL
                             500 mM EDTA(pH8.0) 20mL
                      2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水,均匀混合。
                     3. 将溶液定至1L后,高温高压灭菌。
                     4. 室温保存。

4、3 M 醋酸钠   (pH5.2) 

□组份浓度 3 M 醋酸钠 

□配制量 100mL 

□配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100~200mL烧杯中,加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
                          2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
                        3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
                         4. 高温高压灭菌后,室温保存。

5、PBS Buffer       

□组份浓度 137 mM NaCl,2.7mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4 

 □配制量 1L

□配置方法 1. 称量下列试剂,置于1L烧杯中。
                                                      NaCl                      8 g
                                                      KCl                      0.2g
                                                      Na2HPO4          1.42 g
                                                      KH2PO4             0.27g
       2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解。
      3. 滴加HCl将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1L。
       4. 高温高压灭菌后,室温保存。
       注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

6、10 M醋酸铵        

□组份浓度 10 M醋酸铵 

□配制量 100mL

□配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100~200 mL烧杯中,加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
                        2.加去离子水将溶液定容至100mL。
                          3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。
                         4.密封瓶口于室温保存。
       注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

7、Tris- HCl平衡苯酚   

□配置方法 

1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。  

2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 

3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
          ① 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
          ② 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
          ③ 加入等体积的1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。 
          ④ 重复操作步骤③。
          ⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。 
          ⑥ 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
          ⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
          ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

13、20%(W/V)Glucose    

□组份浓度 20%(W/V)Glucose    

□配制量 100mL 

□配置方法 1. 称取20g Glucose置于100~200mL烧杯中,加入约80mL的去离子水后,搅拌溶解。
                    2. 加去离子水将溶液定容至100mL。
                     3. 高温高压灭菌后,4℃保存。

14、Solution I   (质粒提取用)         

□组份浓度 25 mM Tris-HCl(pH8.0),10mM EDTA,50mM Glucose      

□配制量 1L

□配置方法 1. 量取下列溶液,置于1L烧杯中。
                               1M Tris-HCl(pH8.0)             25mL
                           0.5 M EDTA(pH8.0)            20mL
                           20%Glucose(1.11M)           45mL
                              dH2O                                    910mL
                          2. 高温高压灭菌后,4℃保存。
                          3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A(20mg/mL)。

15、Solution II   (质粒提取用)       

 □组份浓度 250mM NaOH,1%(W/V)SDS           

□配制量 500mL 

□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
                                                        10%SDS                        50mL
                                                         2N NaOH                       50mL
                      2. 加灭菌水定容至500mL,充分混匀。
                      3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。
                        注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌。

16、Solution III   (质粒提取用)          

□组份浓度 3M KOAc,5M CH3COOH      

□配制量 500mL 

□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
                                                        KOAc                            147g
                                                        CH3COOH                    57.5mL
                      2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
                      3. 加去离子水将溶液定容至500mL。
                       4. 高温高压灭菌后,4℃保存。

17、0.5M EDTA   (pH8.0)             

□组份浓度 0.5 M EDTA            

□配制量 1L

□配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O,置于1L烧杯中。
                          2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌。
                          3. 用NaOH调节pH值值8.0(约20g NaOH)。
                                  注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
                          4. 加去离子水将溶液定容至1L。
                          5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
                           6. 室温保存。

18、1 M DTT         

□组份浓度 1 M DTT 

□配制量 20mL

□配置方法 1. 称取3.09g DTT,加入到50mL塑料离心管内。 
                      2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。 
                      3. 适量分成小份后,-20℃保存。

19、10mM ATP           

 □组份浓度 10mM ATP 

□配制量 20mL

□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O,加入到50mL塑料离心管内。 
                     2. 加20mL的25mM Tris-HCl(pH8.0),搅拌溶解。
                     3. 适量分成小份,-20℃保存。

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