一、脂类概述

脂类物质在人体中占有相当大的部分，通常它们在人体内以两种形式存在，第一种为脂肪，主要为中性脂肪，储存的部位如皮下，大网膜，肌间肾周围组织等部位，另外一种为结构脂肪，如磷脂，胆固醇等它们与蛋白，糖类结合在一起存在于细胞内，构成细胞的组成成分。

1、单纯脂质：由脂肪酸各醇化合的酯，如中性脂肪，油及蜡等，苏丹染料可染为黑色或红色。

2、复合物质，脂肪酸的酯经水解后生成醇类，脂肪酸，磷酸和含氮的碱基等，复合脂质分为磷脂和糖脂。

①磷脂：卵磷脂，脑磷脂和神经鞘磷脂。苏丹黑染色为阳性，PAS反应为阴性。

②糖脂，PAS反应呈阳性。

③衍生脂质：指尚具有脂质性质的单纯脂质或复合脂的水产物，属于这类的有脂肪酸和固醇类。

脂肪酸：硫酸耐尔蓝阳性，PAS阴性。

胆固醇及其酯：Schultz试验阳性。

组织化学的脂类物质：

1、中性物质，如甘油三酯，胆固醇及其酯，类固醇和某些糖酯。

2、酸性脂质，脂肪酸，磷脂。

二、苏丹III IV联合法（combined SudanIII IV method for lipids）

1、脂类组织的固定及固定液

脂类组织的固定特别要注意的问题，就是不要选择含酒精的固定液，因为酒精可把脂类物质溶解，因此，用于脂类物质的首选固定液是甲醛，它可较好地保存脂类物质。

2、试剂的配制：苏丹III0.2g，70%酒精50ml；苏丹IV0.5g丙酮50ml。

3、操作步骤：

（1）用经过甲醛固定过的组织作冰冻切片，厚约10-15um，切完后放入蒸馏水中，染色前放入50%-70%酒精洗。

（2）入苏丹III IV染液染5分钟，

（3）70%酒精分化，

（4）水洗，

（5）苏木素浅染细胞核，

（6）水洗，必要时分化，

（7）蓝化，如为漂浮染色，此时应将切片附贴于载片，

（8）甘油明胶封固。

结果：脂类物质呈现橘红色或鲜红，核蓝色。

（1）苏丹III IV是一种偶氮类染料，不溶于水，配制时只能用酒精或丙酮当溶剂。

（2）进入染液前，切片要经过酒精洗，但酒精浓度不能太高，这样染液可以减少沉淀。

（3）最好使用漂浮染色法。这样可充分显示脂类物质。

三、显示脂类的油红法：

（1）操作步骤：

1、福尔马林固定后的恒冷箱切片附贴于载片上或游离切片，厚5-10nm，

2、60%异丙醇稍洗切片，

3、油红O液染5-15min，

4、60%异丙醇洗去多余染液，

5、自来水洗，

6、苏木素染细胞核2min，

7、自来水洗，如果需要可分化，

8、水洗至细胞核蓝化5-10min，

9、擦去多余水分，甘油明胶封固。

结果：脂类物质显示红色，细胞核显示蓝色。

（II）试剂的配制：

油红o（oil red o） 0.5g

异丙醇（isopropanot） 100ml

将异丙醇放入三角烧瓶，再加入油红O，于水浴中慢慢加热使之溶解，待至完全溶解后取出，冷却至室温后，过滤，装于棕色小磨沙口瓶保存，临用前取6ml加蒸馏水4ml，混合后静置10min后过滤，染色时间5-15min。

四、苏丹黑B显示脂类物质

（I）、操作方法：

1、福尔马林固定的组织恒冷箱冰冻切片，附贴于载片上或收集于装有蒸馏水的小烧杯中，厚5-10um。

2、50-70%酒精稍洗切片，

3、苏丹黑B染液中染色5-15min，

4、50-70%酒精洗去多余染液，

5、蒸馏水洗，

6、0.1%核固红染细胞核10min，

7、自来水洗10min，

8、擦去切片上多余的水分，

9、甘油明胶或水性封片剂封固。

结果：脂类物质：黑色，细胞核：红色。

（2）试剂的配制：

苏丹黑B（sudan blank B）0.5g

70%酒精 100ml

取一三角烧杯，装入酒精，再加入苏丹黑，在水浴中边加热边搅拌，直至沸腾达2-3min，取出待冷却后过滤，溶液保存于小磨沙瓶中。

五、漂浮染色法显示脂类物质：

（I）操作方法：

1、选用固定好的组织，用恒冷切片或二氧化碳等冰冻切片均可，切片厚度为5-10um，收集于小烧杯中，内装有蒸馏水。

2、用玻璃弯钩，将切片钩出，于50-70%的酒精中稍洗，

3、将切片钩入染液（上述三种方法中的任一种染液中）浸染5-10min。

4、于50-70%酒精中洗去多余的染液，

5、于苏木素染液中染2min，

6、水洗5-10min，

7、挑选完整的切片，浸入50-70%酒精中，然后放入水中，此时切片由于酒精中的张力，能将切片平整地裱于水的表面，取出载玻片，将切片捞于载玻片上，擦干周边的水分，用甘油明胶或水性封固剂封固切片。

结果：依据选用的方法显示出各自的结果。

（III）注意事项：

1、上述介绍的几种方法是目前最广泛应用的方法，这些方法手续简便，容易操作，效果很好。

2、凡用做脂类染色的组织不管是什么组织，都不能用含有酒精的固定液做固定，必须用福尔马林或福尔马林钙等固定。

3、凡用做脂类染色的切片不能用石蜡切片只能用各种冰冻切片。

4、做脂类染色时，最好是用漂浮染色技术，因该技术能使切片更加充分的染色，漂浮的切片对于脂类的保存更好。

5、在漂浮染色时，当切片从70%酒精移入水时由于酒精的关系导致切片表面张力而浮于水面，并发生打转，如此切片发生碰撞而出现破裂的现象，影响切片的完整性。预防的方法：用玻璃钩钩住切片，慢慢地小心的放入水中，不使浮出水面，当切片上含有的酒精离去后，切片则会沉入水中或沉入染液中。

6、切片封固时，不能烤干或令其自然干，应在湿片的情况下封片。

7、如果切片出现过多的气泡，不能强行将其压出，应将切片放入水中，退去盖片，再行封片，如果将气泡强行压出，将有可能导致脂滴移位的危险。

8、染色时间，不应千篇一律，应视各种组织含有的脂类物质而确定染色时间，

9、染液遇水易发生沉淀，染色时应该尽量减少切片水分的含量，进入染液时切片应尽量擦干水分。

10、配好的染液应密封保存，减少与空气的接触，防止发生氧化或挥发而发生沉淀。

六、Schultz法显示胆固醇与胆固醇酯

（I）操作方法：

1、组织固定于10%福尔马林2天，

2、冲洗组织，冰冻切片10-20um，

3、切片用蒸馏水稍洗，

4、2.5%铁明矾水溶液氧化切片2天或更长，

5、蒸馏水洗，

6、将切片捞于载玻片上，擦干四周水分，但勿令切片干燥，

7、滴入反应液于切片上并随之盖上盖玻片，

结果：胆固醇和胆固醇酯呈绿色反应，当反应时间延长至30min时，反应物则转变为棕褐色。

（I）试剂的配制：

醋酸——硫酸混合液：

冰醋酸 10ml

浓硫酸 10ml

取一容器，盛入冰块或冰水，将冰醋酸装于小瓶后置入冰块中，再加入硫酸，混合后静置数分钟后取出即可。

（II）注意事项：

1、胆固醇和胆固醇酯显示好坏， 取决于切片氧化的程度，本法用的2.5%的铁明矾氧化2天或更长，如果在2天里的氧化效果不好，则可再延长氧化的时间。

2、皮尔斯主张2.5%的铁明矾用0.2M醋酸盐缓冲液来配制，且于 37℃处理7天。

3、配制醋酸和硫酸混合液，纯度要求较高，应用分析纯以上，如纯度较低，杂质含量较高，混合好可产生大量的气泡，影响观察。

临床应用：

1、鉴别脂滴和糖元。在HE切片中，如在胞浆内有大小不等的空泡出现，这主要有可能发生的是：脂滴被溶解，或糖元在常规处理时丧失掉了。用脂肪染色可以给予证明。

2、观察肝细胞，心，肾，骨骼肌细胞糖元的分布。如急性心缺血，心肌细胞由于缺氧面消耗了糖元。

3、鉴别横纹肌瘤和颗粒细胞母细胞瘤，前者阳性，后者阴性；而泡末细胞瘤和卵巢纤维瘤的区别，前者为阳性，后者为阴性。

4、与黏液物的区别。

5、Fabry病的诊断：Fabry病是一种α-连锁先天性糖鞘脂代谢障碍，细胞浆物质PAS和苏丹黑染色呈强阳性反应。

甘油明胶配法：

甘油50ml，蒸馏水50ml，明胶10g，酚0.5ml。把明胶溶于蒸馏水，搅拌片刻，放入37℃的温箱中过夜。第二天再加入甘油，加入酚做防腐，然后存放于4℃冰箱中，用时取出，用热水促其溶解即可使用。