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巨噬细胞和淋巴细胞非特异性酯酶染色的方法

标签: 巨噬细胞 淋巴细胞 非特异性 酯酶 染色 方法

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问:这可能是一个非常初级的问题,但查了几本书却无任何信息,文献上都是轻描淡写地一提,好像是太原始了似的。可是,我真的不知道该方法如何操作——酯酶浓度,配方以及染色时间等等,盼各位战友的回音。谢谢。

答:以前做过,是做淋巴细胞的。不过巨噬细胞方法一样的,更容易出结果。

非特异性酯酶
一固定液 甲醛-丙酮缓冲液(PH=6.6)
Na2HPO4  20mg,12 , 50.39mg
KH2PO4  100mg
dH2O    30ml
丙酮    45ml
40%甲醛  25ml

固定血细胞用

二孵育液4%
1.付品红    4g
2N盐酸  100ml将付品红加入到2n盐酸中,水浴溶解过滤后,置4℃,保存备用
2.4%亚硝酸钠液
亚硝酸钠  400mg
蒸馏水    10ml
3.六偶氮付品红溶液
临用前取4%亚硝酸钠溶液3ml,边摇边滴入3ml付品红中,再充分震荡,1min备用
4.2%α醋酸萘酯溶液:取2gα醋酸萘酯溶于100ml乙二醇甲醚中,置4℃冰箱,避光保存备用
5.M/15PH7.6磷酸缓冲液
甲液:KH2PO49.08g溶于1000ml蒸馏水,乙液Na2HPO49.47g溶于1000ml蒸馏水 12H2O,23.882
取甲液13ml,乙液87ml,混合即可
KH2PO40.59g,Na2HPO412H2O 10.39g-500ml
孵育液临用前配制:取m/15,PH=7.6缓冲液89ml,逐滴加入六偶氮付品红液6ml,充分混合后,再滴入2%醋酸萘酯2.5ml,充分混合后调整pH至5.8-6.4

以下石蜡切片,冰冻切片可以用4%多聚甲醛固定,先固定与切片后固定均可

二石蜡切片
1.  将被检组织置于4℃10%中性甲醛钙溶液中固定,过夜
2.  移入4℃holt氏阿拉伯胶糖液至少24hr
3.  置于4℃50%丙酮1hr
4.  转入4℃100%丙酮24hr(换两次),最后一次留在室温约1-2hr
5.  在二甲苯 中透明30min(换两次)
6.  56℃浸蜡30-45min
7.  切片 置于室温或37℃温箱干燥1-2hr。
8.  二甲苯脱蜡,经100%丙酮,50%丙酮各2-3min,然后进入蒸馏水
9.  孵育后步骤与血涂片同,但需经50%丙酮及纯丙酮各30s-1min,二甲苯 透明,然后封藏

holt氏阿拉伯胶蔗糖液
蔗糖30g
阿拉伯胶1g
100ml

用这个酶扩散少些。

1%甲基绿染色液

用于复染

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