问:辣根过氧化物酶标记重组抗原的方法。 答:和标记抗体一样。 1. 取HRP 5mg溶于0.2mol/L PH 5.6 醋酸盐缓冲液 0.5 ml;加入新鲜配制的 0.1mol/L NaIO4 0.25 ml; 混匀。(此时溶液颜色应由黄棕色变为墨绿色)4oC 30 min。 2. 加入2.5%已二醇 0.5 ml, 混匀。室温置30 min。(此时溶液应恢复为黄色) 3. 加入待标记抗体 5~10 mg, 用 1.0 mol/L PH 9.5 CBS 调PH至9.0, 混匀。4oC 过夜 4. 加入NaHB4 0.1 ml (0.5 mg), 混匀。4oC 2小时后对0.01mol/L PH 7.4 PBS 透析,4oC 过夜。 加入适量中性甘油后小量分装。 |
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