胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物,它不仅参与血浆蛋白的组成,而且也是细胞的必要结构成分,还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在,统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一方法。 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质,此物质在550nm波长处有最大吸收,可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100ml内,与OD值呈良好线性关系。 本法不必离心,颜色产物也比较稳定,胆红素及一般溶血对结果影响不大,严重溶血者才使结果偏高。本法在20~37℃条件下显色,显色后5分钟开始至半小时以上颜色基本稳定。温度过低,显色剂强度减弱;加混合酸后振摇过激能使产热过高,也可使显色减弱。 试剂和器材 一、试剂 邻苯二甲醛试剂:称取邻苯二甲醛50mg,以无水乙醇溶至50ml冷藏,有效期为一个半月。 混合酸:冰乙酸100ml与浓硫酸100ml混合。 标准胆固醇贮存液(1mg/ml):准确称取胆固醇100mg,以冰乙酸溶至100ml。 标准胆固醇工作液(0.1mg/ml):将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍: 即取10ml用冰乙 酸稀释至100ml。 二、测试样品 0.1ml人血清以冰乙酸稀释至4.00ml。 三、器材 试管1.5×15cm(×12);吸管0.5ml(×5),10ml(×1),0.1ml(×1);WFJ UV-2000型分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取9支试管编号后,按下表顺序加入试剂: |
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