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a一醋酸萘酯酶(ANAE)染色法步骤

标签: a一醋酸萘酯酶 ANAE 染色法 步骤

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问:谁有a一醋酸萘酯酶(ANAE)染色法的具体步骤,我们这里查不到,还望各位大侠不吝赐教!

答:中性非特异性脂酶(α—NAE)染色

[方法学]

酯酶染色的方法很多,根据与pH底物等不同作用,将常用的酯酶染色法分为两大类,即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。后者又可分为3类:①中性非特异性酯酶染色法:α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。②酸性非特异性酯酶染色法:α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。②碱性非特异性酯酶染色法:α—丁酸菜酯酶。中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法,一般实验室可选用此法。

[原理]

α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚,萘酚与重氮盐偶联,生成灰黑或棕黑色沉淀物,定位于胞浆中。

[试剂]

1、α—醋酸萘酯丙酮液:α—醋酸萘酯1g,加丙酮和蒸馏水混合液100m1,溶解后贮于磨口带塞三角瓶内,4℃保存,可使用半年。

2、pH7.4磷酸盐缓冲液:0.07MNa2HPO4(即Na2HPO4)

3、基质液:磷酸盐缓冲液82ml,缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1.6ml(滴速约每分钟40滴),边加边用力振摇。根据5分钟后,加坚牢蓝B80mg,剧烈振摇10分钟,立即过滤,滤液两杯,各40ml。

4、氟化钠基质液:称取氟化钠(NaF)61mg加入上述其中基质液1杯内,混匀后,标上标记。

[操作]

(1)新鲜涂片两张,分别标上NSE和NaF记号,滴加10%甲醛生理盐水,固定5分钟,用自来水轻轻冲洗,当心血膜脱落,晾干。

(2)两张涂片同时放入各自染色杯内,37℃水浴1小时。

(3)取出后水洗,晾干后镜检。不用复染。

[结果观察]

在胞浆内若有棕黑色或灰黑色弥漫性颗粒沉淀者为阳性,细胞脑浆为黄色者为阴性。

[临床意义]

1、阳性:单核细胞和组织细胞呈强阳性,但可被氟化钠抑制;巨核细胞及血小板呈阳性;早幼粒细胞白血病时早幼粒细胞可阳性,且不受氟化钠抑制。

2、弱阳性及阴性:粒细胞、淋巴细胞一般为阴性,若有弱阳性也可被氟化钠抑制。

3、临床鉴别:主要用于鉴别急性单核细胞性白血病与急性粒细胞性白血病,前者NSE阳性,且受氟化钠(NaF)抑制;而后者NSE阴性,若有阳性也不受氟化钠抑制。

[附注]

(1) 坚牢蓝B和氟化钠可小包分装后干燥器保存

(2) 基质液配制过程中要振摇,以促使基质溶解。冬天配制时应适当加温(置于37℃水箱操作)。基质液现配现用,不能保存,过滤后应尽快试验,以免大量沉淀物析出,影响染色效果。

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