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标签: 蛋白酶 活力测定

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问:在福林—酚法中,在1ml酶液中加入0.4M的三氯乙酸1ml,这些三氯乙酸是不是足以使酶全部失活,这些三氯乙酸能使多少酶失活。是不是在加完三氯乙酸在加酪蛋白就应该没有颜色?

答:不一定能使酶完全失活,除了蛋白质溶解情况有差异不说外,有的原因我还说不清,就像121度10min能杀死90%某菌,而再延长10min并不能降该菌完全杀死一样。所以实际应用中要寻找合适的酶浓度,一般所选择的蛋白酶活力在5-20U/ml的范围内比较适宜。这要通过预实验来简单摸索。

另外在加完三氯乙酸再加酪蛋白还应该有颜色,因为酪蛋白的某些氨基酸(含酚基)会暴露在外,仍然可以将福林试剂还原,就像茚三酮比色用于测氨基酸,但有时候可以用来粗略用于蛋白质的测定一样。所以要有空白对照!

 

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