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植物ATP酶测定方法

标签: 植物ATP酶 测定 方法

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问:植物液泡膜H+-ATP酶的测定:参照Ballasteros等(1996)的方法,略加改动。酶活性以每mg膜蛋白单位时间内水解ATP或PPi所释放的Pi的量表示(酶活单位:μmolPimg-1蛋白 h-1)。

酶活测定反应体系0.5ml,反应以加入10μg的膜蛋白启动。于37℃反应15min后,加入50 μl的55%的TCA终止反应。Pi的含量通过加入1ml的Ames试剂进行测定(Ames 1966)。反应体系组成:Tris-Mes 36mmol/L pH 7.0(ATP酶)或pH 8.0(PP酶),MgSO4 3mmol/L,ATP-Tris 3mmol/L pH7.0或PPi-Tris 0.3mmol/L pH8.0,NaMoO4 0.1mmol/L,NaN3 2mmol/L,Na3V3O4250μmol/L,KCl 100mmol/L或KNO3 100mmol/L。

V3O43-敏感的H+-ATP酶活性:以上述反应体系存在和不存在Na3V3O4 250μmol/L时两者酶活性的差值表示。NO-3敏感的H+-ATP酶活性以反应体系存在和不存在KNO3 100mmol/L时酶活性的差值表示(O'Neill等1983)。K+激活的H+-PP酶活性以反应体系存在或不存在KNO3 100mmol/L时酶活性的差值表示(Wang和Sze 1985)。

郭房庆,黄昊,汤章城。NaCl 胁迫对小麦抗盐突变体根液泡膜H+-ATP酶和H+-PP酶活性的影响。植物生理学报,1999年,第25卷,第4期 Vol.25 No.4 1999 。郭房庆.rar

 

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