问：哪位大侠做过病毒纯化，可以提供一个病毒立离心纯化的详细protocol吗？拜托了，先谢谢大家了！

答：病毒提纯有很多方法的 ，可以用理化方法浓缩，吸附法，超速离心法等。我以前用PEG沉淀法，比较简单。

1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；

2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG；

3、4度过夜或放置一段时间；

4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀；

5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4度过夜；

6、10000/min离心1小时。

还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。

问：您的方法对我现在太有帮助有了，谢谢。但有几个地方不是很清楚，可以向你请教码？

1、我的是鸡胚鸟囊液，病毒效价为1：640，只有6ml左右，效果怎样？

2、第二步加等量10％PEG是什么意思？您用的PEG的分子量是多大的？10％是PEG溶液的浓度吗？

3、最后 一步离心后还是收集沉淀吗？

答：一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore 公司的 离心浓缩柱，Amicon 系列的可以一次浓缩15ml样品。记得有一篇关于PEG方法沉淀 HAV的文献，你可以去下载看看参考。10％PEG是，应该是终浓度。离心后要的是沉淀，即浓缩的病毒。