任何一个生物学实验室都需要有清洗器皿和消毒等工作内容，需要使用大量消耗性物品，如玻璃器皿、金属器械、塑料、橡胶制品、布类、纸类等，虽然其中的大部分物品在国外采用的是一次性用品，但国内大部分实验室仍以可反复使用的物品为主，因此，掌握清洗、包装和消毒知识，学会清洗、包装和消毒方法是学习和从事细胞培养工作必须的。
清洗和消毒不但能除去器皿表面残留的微量有毒物质，而且能改变玻璃表面性质，有利于细胞的粘着和生长。Rappaport(1960)证明玻璃表面性质与细胞的粘附和生长能力有关。她将细胞悬浮在一已知成分的人工培养液内，培养于含有不同成分的玻璃表面上。她观察到细胞在玻璃表面上的粘附率不同，软质玻璃比Pyrex硬质玻璃更适于细胞粘附，特别是玻璃表面的总负电荷和钠离子的含量与细胞粘附密切有关。Rappaport等将新的小瓶子浸在含有0.1%NaOH的0.01 mol /L乙二胺四乙酸钠盐溶液（EDTA-Na）中，121℃蒸汽消毒处理30分钟，倒掉溶液后用重蒸水洗涤，再用含有0.005%结晶紫溶液浸泡1小时，玻璃表面均匀染上紫色，表明小瓶的预处理恰当；然后再用含0.2mol/LNa2CO3的0.2mmol/L EDTA-Na溶液，121℃蒸气处理30分钟，缓慢降低气压，取出瓶子，用重蒸留水洗涤。经过这样处理后，玻璃表面质量便有很大的改善，可使各种类型的哺乳类细胞在其表面上粘附和生长。
现在国际上已提供由不同成分配制的、并经特殊处理的一次性玻璃器皿，已经消毒,购来后可直接应用。还设计有各种无毒的塑料容器，也是购来即用，用后即丢。这样可以减少工作人员的工作量，但是仍有不少需要清洗和消毒的工作。
组织培养术对水的质量要求是一致的。如果水的质量低劣，最终会影响到细胞生长和实验结果的准确性。所以高度净化水的制备是很重要的，而且是准备各种培养液或溶液时的先行工作。
配制溶液时应采用新的，具有电阻为1.5—2.0uΩ重蒸馏水。蒸馏水贮放时间太长久，电阻水平下降为0.6—1.0µΩ，甚至水中会含从贮藏瓶壁上溶解下来的杂质，如来自塑料瓶的有机物质或来自玻璃的离子等。因久存， 由于大气的CO2溶解而引起的电阻增加则是许可的。如果带有离子类或大分子类（微生物类的内毒素）就绝不能再用，应弃之。
在准备室选择一处洁净、无尘、清静的地方放制备纯化水的装置。所得的纯化水贮备在专用的干净玻璃瓶内，最好用硼砂硅玻璃瓶内，标记上制备的日期。
纯化水的常用制备方法
1.去离子法和石英双重玻璃蒸馏器法结合
水中杂有溶解或不溶解的矿物盐、油脂及酸类，以及O2,CO2,H2S,Cl2等。这些物质通过离子交换树脂的处理可以除去。根据水中杂质的性质，可以采用阳离子树脂或阴离子树脂处理。常用的是将强酸性阳离子交换树脂和强碱基性阴离子交换树脂混合装入离子交换柱内，将水流通过离子交换柱即得纯净的去离子水。去离子水再经过双重蒸馏器蒸馏得纯化水，用于配制溶液。
2. 超纯水装置制备纯化水
要根据实验要求选择去污剂。肥皂水较常用，肥皂水有助于润湿器皿，对不可混合的液体能起乳化剂的作用，对固体物质起着离散作用。缺点是易与Ca2+和Mg2+以及硬水中的金属离子形成不易溶解的螯和物。碱性去污剂和含有重铬酸钾的硫酸普遍被采用。将玻璃器皿先浸于肥皂水，冲掉肥皂水后，再浸于硫酸洗液中过夜，然后用自来水冲洗、去离子水冲洗，此效果是比较理想的。
使用洗涤剂煮沸物品应注意事项：煮沸前的水面要高干器材5厘米，水沸后投入洗涤剂（直径35厘米的铝锅，用洗衣粉10克左右）.若洗涤剂和实验器材同时从冷水煮至沸腾或使用过量洗剂均易腐蚀玻璃表面，使玻璃碱化PH值上升．．
离体条件下，有害物质可直接与细胞接触，细胞对任何有害甚至有益的物质十分敏感，极少量残留物就会对细胞产生毒性作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，使其达到不含任何残留物要求。因不同培养器皿的材料、结构、使用方法不同，清洗的方法也有区别，现分别介绍如下：
（一）玻璃器皿类的清洗和包装
要达到最有效的洗涤，需注意以下几点：①用过的玻璃器皿，不要让它干掉，应立即浸泡在清水或消毒水中，以去除潜在的生物性危害；②挑选一种去污剂，对本工作有效，又易于漂洗；④用流水冲洗干净，再用去离子水或重蒸馏水漂洗；③洗过的玻璃器皿作倒立式放在干燥箱内烘干或自然凉干；⑤用牛皮纸或锡箔包装后，放置干净无尘处，待消毒玻璃器皿的清洗一般要经过浸泡、刷洗、浸酸和清洗四个步骤。
1.浸泡 新的或用过的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以软化和溶解附着物。新的玻璃器皿使用前得先用自来水简单刷洗，然后5%盐酸浸泡过夜；用过的玻璃器皿往往
附有大量蛋白质和油脂，干涸后不易刷洗掉，故用后应立即浸入清水中备刷洗。
2.刷洗 将浸泡后的玻璃器皿放在洗涤剂（不能用含沙粒的洗衣粉）水中，用软毛刷反复刷洗。刷洗中，要不留死角，并防止破坏器皿表面的光洁度。将刷洗干净的玻璃器皿洗净、晾干，备浸酸。
3.浸酸 浸酸是将上述玻璃器皿浸泡到清洁液，又称酸液中，通过清洁液的强氧化作用清除器皿表面可能残留的物质。根据清洁液含硫酸比例，将清洁液分为强酸、次强酸和弱酸三种。根据需要配制、选用不同的清洁液。清洁液对玻璃无腐蚀作用，去污效果很好，是保证器皿洁净的关键一环。一般来说，新的或用过的玻璃器皿都应浸酸，那些无法用毛刷刷洗的用品（如吸管、滴管等）更要靠浸酸去除污物。浸酸时，器皿应完全被清洁液充满和覆盖。浸酸时间不能少于6小时，一般要过夜或更长时间。将器皿放入清洁液时，应小心操作，防止伤及皮肤、眼睛或衣服。从清洁液中取出器皿时，应沥干清洁液，并将浸酸的器皿放入合适容器，如塑料盆中运输。
配制清洁时，操作者必须小心认真，戴耐酸手套和防护眼镜，并严格按下列方法进行。
（1）选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。
（2）按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中。（用玻棒搅拌助溶，有时不能完全溶解）。
（3）缓缓加入浓硫酸，切忌过急，否则将产热而发生危险（绝不可将重铬酸钾液倒入浓硫酸中）。
（4）自然冷却、备用。
新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过久，清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃去（深埋地下），配制新的。配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品；目前细胞培养实验室都定做一种专用耐酸塑料容器。
4.冲洗 刷洗和浸酸后的器皿都必须用水充分冲洗，浸酸后器皿是否冲洗得干净，直接影响到细胞培养成败。冲洗可用洗涤装置，也可用手工操作。手工洗涤浸酸后的器皿时，每件器皿都至少要重复“注满水-倒空”20次以上或者每瓶灌2／3容积的自来水，振荡后倒掉，重复20次以上（尖滴管置量杯中冲洗），最后用重蒸水浸洗2～3次，晾干或烘干后包装备用。对已用过的器皿，凡污染者必先经煮沸30min或放2～5%盐酸中浸泡过夜等理化方法灭菌，未污染者可不需灭菌处理，但仍要刷洗、清洁液浸酸过夜，冲洗等。
滴管类的清洗，消毒过程与吸管相同。滴管尖端易断碎，所以清洗包装时小心。
（二）螺旋盖的清洗和包装
玻璃瓶盖有衬以合成的橡皮或矽垫的铅制盖和聚丙烯盖。
1.铅盖 将铅盖浸于去污剂15分钟后，然后将其放在烧杯内，通入自来水漂洗，每15分钟，要搅动铅盖一次。再用去离子水冲洗。取出铅盖放在不锈钢篮内烘干。注意：铝制品在碱性的去污剂中不能超过30分钟，也不可用浸泡过铝制品的去污剂浸泡玻璃器皿。
2.聚丙烯盖 矽硅塞子 这种盖和塞子应按铝盖的方法浸洗。由于聚丙烯盖子易漂浮在水面上，所以应加些重量使其沉没。
清洗干净的盖子放在大培养皿内，盖子开口向下，用软纸包扎或用蒸气可透入的尼龙膜（Portex）包装。
（三）橡皮帽和橡皮塞的清洗
新的橡皮帽和橡皮塞在2%NaOH（约0.5mol/L）溶液中浸泡过夜或煮沸处理15分钟，用自来水冲洗；再用2%～5%HCl浸泡30分钟。再用自来水冲洗；最后用去离子水浸泡过夜再冲洗后烘干。用过的橡皮帽、橡皮塞则用沸水处理，清水漂洗，去离子水冲洗、烘干即可。
（四）橡皮管的清洗
新的橡皮管的清洗步骤同橡皮塞的清洗步骤。为了保证橡胶皮管内的清洗，可用注射器反复吸或放洗涤剂的方法进行冲洗。接在热水管上用热水冲洗去污剂，用去离子水冲洗后烘干。
用过的橡皮管则用热水冲洗，去离子水冲洗、烘干。
（五）塑料制品的清洗
塑料制品的特点是：质地软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。其清洗程序为：使用器皿后立即用流水冲洗→浸于自来水中过夜→用纱布或棉签和50℃洗涤液刷洗→流水冲洗→晾干→浸于清洁液中15分钟→流水冲洗20遍→蒸馏水浸洗三次→双蒸水中泡24小时→晾干备用。
（六）不锈钢除菌滤器的清洗
用洗涤剂刷洗新的或使用后的滤器→流水冲洗15分钟→去离子水浸泡24小时→三蒸水浸泡24小时→干燥备用。
（七）金属器械的清洗
新购进的金属器械常涂有防锈油，先用沾有汽油的纱布擦去油脂，再用水洗净，最好用酒精棉球擦拭，晾干。用过的金属器械应先用酒精棉球擦拭干净，再煮沸或高压消毒以备下次使用。
(八)针头式塑料小滤器（注射式小滤器）
由塑料制成，分下、下两部分，上部分接注射器，下部分接滤过无菌瓶。洗刷时先将上下两部分松开，注意垫圈和垫片摆放的位置。处理同塑料器皿，晾干后将纤维薄膜滤片夹在中间（光面向下）拧紧上下两部分，摆放于金属盒内或单独包装，高压灭菌后备用。
（九）玻璃漏斗式滤器的清洗
新的滤器清洗：将玻璃除菌滤器置玻璃滤器洗液（配制方法：取10g硝酸钠溶于盛有470ml蒸馏水的玻璃缸内，加入28.6ml浓硫酸混匀备用）中浸泡24小时→流水缓慢冲洗至pH5.5左右→用4倍体积的蒸馏水缓慢冲洗→再用重蒸水缓慢冲洗→烤干→包装、消毒，备用。
用过的滤器清洗：用过玻璃除菌滤器后，立即浸泡于水中（注意：千万不能使滤器干涸）过夜，流水缓慢冲洗24小时或更长时间，至滤面基本疏通时，50℃烤干，滤器再置于清洁液中浸泡24小时，或装满清洁液自然过滤。流水冲洗及其后的处理同新的玻璃除菌滤器。
包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再行消毒灭菌处理。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。包装分为局部包装和全包装两类，前者用于较大瓶皿，一般用硫酸纸和牛皮纸将瓶口包扎好；后者适于较小培养瓶皿、吸管、注射器、金属器械和胶塞等，以下为常用瓶皿、吸管、无菌衣帽等的包装方法，其它物品可参照处理。
1.瓶类：硫酸纸罩以瓶口，外罩二层牛皮纸用绳扎紧。
2.小瓶皿、胶塞、刀剪等器械可先单独用单层牛皮纸包装，再将同时使用的物品用双层牛皮纸包装到一块，用绳扎紧；也可将这些器械直接装入消毒盒内，消毒时打开排气孔，消毒后再关上备用。
3.吸管、滴管口用脱脂棉塞上（不要太紧或太松）装入消毒筒内或单独包装，滤器、滤瓶、橡皮管等都要用牛皮纸包好口， 外罩一层牛皮纸包好，再用包布包好。
4.无菌衣、帽、口罩，均以牛皮纸或包布包好，绳扎好。
污染，特别是微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因。细胞培养所用的培养基是微生物生长的最合适营养物，微生物在其中的生长速度要比培养的细胞快成千上万倍，并产生毒素和改变培养基成分、pH等，导致细胞生长停止，甚至死亡。因此，细胞培养中，必须保证细胞在无微生物条件下生长。通常，通过消毒灭菌（将已存在的微生物杀死）和无菌操作技术（防止已经消毒灭菌的用品被污染）来防止培养物污染。
目前，多采用物理方法和化学方法消毒灭菌，抗生素也是一种重要的灭菌手段，实践中需根据消毒灭菌的物品不同而选择合适的消毒方法。
（一）物理消毒法
1.紫外线消毒 紫外线（ultraviolet）是一种低能量的电磁辐射，可以灭多种微生物。其中，革兰阴性菌最为敏感，其次是革兰阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。紫外线的直接作用机制是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。目前多种紫外线灯直接照射培养室（空气、地面、工作台表面等）进行消毒，用法简便，效果好。
紫外线的消毒同紫外线的辐射强度和照射剂量呈正相关，辐射强度随距灯管的距离增加而降低，照射剂量和照射时间成正比。因此，紫外灯同被照物之间的距离和照射时间要适合。如用离地面2m的30W紫外灯可以照射9m2的房间，每天照射2～3小时，期间可间隔30分钟。灯管离地面2m以外时，要延长照射时间，2.5m以上则效果较差。紫外线照射工作台面的距离不应超过1.5m，照射时间以30分钟左右为宜。
紫外灯照射还受其他环境条件，如室温和湿度、空气清洁度、遮挡物、染菌量、紫外灯管的老化程度等影响。紫外线不仅对皮肤、眼睛有伤害，而且对培养细胞与试剂等也产生不良影响，因此，不能开着紫外灯工作。
2.电离辐射灭菌 电离辐射灭菌是以放射性核素产生的γ射线或电子加速器产生的加速离子辐射物品以杀灭微生物的方法. γ射线由放射性核素60Co产生，加速粒子由电子加速器产生，两者均可对金属、塑料、橡胶、玻璃、陶瓷、人工医学制品等进行灭菌。其灭菌的优点是，灭菌时物品不会升温，尤其适用不耐热的物品灭菌；辐射的穿透力强，可直接对密封包装的物品进行灭菌；辐射灭菌方法简便，不须考虑限制因素。培养工作中所用的许多一次性器械、物品，如培养瓶、培养皿、培养板、注射器、移液器吸头、离心管等，都可用辐射方法灭菌。但由于电离辐射的诱变作用很强，因此，不适合消毒活的生物材料。另外，电离辐射灭菌需要专门设备，灭菌时须由专业人员指导和操作。
3.湿热灭菌 压力蒸气灭菌是最常用的灭菌方法。高温高压蒸气对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝固而使微生物死亡。布类、衣物、玻璃器皿、金属器械、胶塞和某些培养用液等都可用这一方法灭菌。
不同压力蒸气所能达到的温度不同，不同的消毒物品所需的有效消毒压力和时间不同。一般物品采用压力15lbf/in2(121℃),维持15～30分钟，培养用液和橡胶类物品采用压力10lbf/ in2(125℃),维持10分钟。
达到有效蒸气消毒还需注意以下几点：（1）蒸气消毒锅本身的洁净；（2）待消毒物的包装用品和包装方式，包装用品要有利于湿热蒸气的浸人和空气的流出，又可避免蒸气消毒后取出时空气浸入的污染。一般可用两层棉布包装，或用棉布做的布袋包装。瓶子的螺旋盖要解松，再包扎好。有溶液的瓶口用棉花塞，外包纱布。放吸管的容器下面垫几层纱布，垂直放置，有利于空气流出。瓶内溶液体积不能满过2/3，在瓶上做好溶液面的标记，如有少量水分蒸发，用消毒蒸馏水补充；（3）待消毒物体在消毒锅内不能堆积太满，在物与物之间要留有空隙，使有利蒸气穿过；（4）消毒结束冷却过程，在锅门上标记已消毒的标签；（5）取出消毒物后，潮湿的布类等放到烘箱内烘干。溶液类则在消毒房间内取掉棉花塞，盖上消毒的螺旋帽或橡皮帽等。用布类包装过滤装置和橡皮管等，也要放到烘箱内烘干备用，否则，潮湿的包装物品表面易为微生物污染。
煮沸消毒也是常用的湿热消毒方法，它具有条件简单、使用方便等优点。
4.干热灭菌 干热灭菌主要是将电热烤箱的物品室加热到160℃以上，并保持90-120分钟。
这种消毒法仅限用于一些不能直接与蒸气接触的物品，或不至于被高温损坏的物品。
高温消毒主要是尽可能使烘箱内物品受热均匀。一般160℃，120分钟干燥消毒相当于121℃，20分钟的蒸气温热高压消毒。由于干燥高温穿透较缓慢和不均匀，因此消毒时间从烘箱温度到达时起，至少要有90分钟。烘箱温度计的插入位置要适中，最好每层都有温度计。启动烘箱温度计的插入位置要适中，最好每层都有温度计。启动烘箱风扇有助热气循环。消毒时间终了时，关掉烘箱开关使逐渐降温后再开烘箱门，这一方面可能由立即开门使温度骤变会引起玻璃器皿的破损，另一方面也可能由于温度骤变引起收缩而把外界空气带进。
干热消毒与蒸气消毒一样，烘箱内物与物之间要留有空隙。装载物品要略远离加热器位置，避免局部温度太高，或由于温度太高引起包装纸和布被烧焦。
5.过滤除菌 过滤消毒大多用于遇热不稳定的试剂或培养液。根据液体性质，流速，含颗粒大小和除菌的要求而选择过滤方式。
（1）过滤介质的基本性质 组织培养技术中使用的滤器型号虽然多种多样，但过滤介质即过滤板的结构基本归纳为三种类型：深度过滤板（depth filter）、筛状滤板（screenfilter）和膜状滤板（membrane filter）。
深度滤板一般由纤维、颗粒性细碎材料紧压缠绕形成的板，板的两面间有一定的深度，形成具有曲折交错的液体流动渠道。纤维的粗细，颗粒的大小，压紧程度决定渠道的排列和粗细。石棉滤板属于这一类。用这种滤板过滤，一般压力限制在15-20磅，压力加大会使一些颗粒通过流动渠道到滤液中，使过滤消毒失效。深度滤板还有介质移动缺点，过滤时常有介质脱落。
筛状滤板可由多种材料制成，如不锈钢、镍、尼龙、聚脂等。孔径均匀，分布有规则，可按孔径大小不同定级。凡颗粒最小直径超过筛孔大小的，都不能通过。但上述材料编织的孔径最小的为2μm的筛板孔，对小于2μm的细菌无清除作用。玻璃漏斗式滤器属于这一类。
膜状滤板是用纤维素脂为材料制成的孔径大小从10μm到0.025μm的一系列孔径均一的薄膜，可直接用于除菌过滤。但由于过滤时，污物停留在膜的表面，所以去污力较低。当过滤大量的或污染严重的液体时，最好先用深度滤板过滤后再用滤膜过滤。滤膜耐高温，可干燥加热到200℃；也耐高压，经适当支撑后，滤膜可耐受至少10000磅的压差。可用高压蒸气消毒。
（2）比较正压与负压过滤除菌 正压过滤优点：流速高，过滤快；可将需过滤的液体直接滤到储存瓶内，不需要缓冲瓶，不会出现由于真空泵倒流而造成的污染；过滤蛋白质时可避免产生大量气泡；有利过滤沸点低的试剂。
负压过滤正相反。由于收集瓶是在真空状态下收集滤液，因此真空瓶与外界之间的任何微小通路都可能成为污染的来源。过滤沸点低的试剂，由于容器内呈真空，使试剂不断挥发。不过负压过滤较为方便，尤其是过滤体积较小的液体。
（3）过滤系统的设计和选择 市场上已有多用的过滤品出售。有金属的，也有塑料的过滤装置。还有不同型号的一次性的滤器产品，有注射器式，圆柱注射器式，具有直径为47mm圆盘滤器，以及“Twin90”等型号。
1）正压过滤系统的程序：① 首先选择合适体积的滤器，放好固定滤器的支架，将消毒部分和不消毒部分装配成一套正压过滤系统；
②将预备过滤的培养液等液体倒入压力容器瓶内；③将水泵打开，给予100kPa的压力，使培养液等通过滤膜过除菌，滤液导入消毒接收瓶内；④通过接收器出口，将消毒的液体分装入培养液贮存瓶内，加盖，贮存备用。
2）负压过滤系统程序：
①选择体积合适的滤器，将消毒部分和非消毒部分装配成一套负压过滤系统；②将预过滤培养液倒入滤器溶器内；③ 打开水泵或真空泵抽气，使真空瓶成真空，未消毒的培养液通过滤膜过滤到真空溶器瓶内； ④将消毒的培养液分装入培养液母液贮存瓶内，加盖，贮存备用。
应当注意的是，负压抽滤后拆除滤器前需解除真空。为了避免空气充入真空瓶内易造成污染，最好在连接真空滤液容器和真空缓冲瓶间的真空管道中间安装一个球形砂芯玻璃滤菌器，或0.5μm孔径滤板过滤空气，与真空滤液容器等一块包装消毒。
3）配有预过滤的过滤系统程序：有些液体如血清，需要通过0.2μm孔径滤膜过滤消毒。由于这种液体粘度大，并存在有颗粒样物质，因此直接通过0.2μm孔径的滤膜过滤有困难，所以应先通过一系列等级不同的预过滤，然后再过滤消毒。过滤5-10L胶样溶液。系列预过滤器可以是不锈钢网支持的软片型过滤器，孔径为5、1.2、0.45μm的过滤器，系列预过滤后，与一个消毒的附有0.2μm孔径膜的Twin-90滤器连接，最后连接到消毒的收集器。其余过滤程序与上述方法相同。
4）堆积式过滤装置：过滤小于1L的胶样溶液采用此系统，见图4-6，其余步骤同上述。
5）再用滤器的装配和使用：整套装配见图4-7。①整套是消毒的，未消毒的培养液可以直接放入滤器容器内，或通过加压槽将未消毒的培养液加入到容器内；②打开泵加压；其余步骤同上。
6）注射式的过滤器：当过滤10-20ml或少于50ml的血清或溶液时，可采用注射器式过滤器。夹有滤膜的滤板接到注射器上。一系列注射器型的滤板和滤膜都有商品出售。
（二）化学消毒法
化学消毒是利用化学消毒剂来消毒那些不能用物理消毒等方法进行消毒的物品和场地，如无菌室的空气、台面、操作者的皮肤等。细胞培养中常用的化学消毒剂包括甲醛、环氧乙烷、乙醇、氯已定（洗必泰）、戊二醛、碘伏和碘酊、乳酸、来苏尔等。此外，市场上以各种商品名所称的化学消毒剂多为复合类制剂，可用台面、地面等的消毒，使用时按说明书进行。
1.甲醛 甲醛（methylaldehyde）是一种广谱灭菌剂，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。通常无菌室内的空气和物体表面灭菌就是利用甲醛加热或在甲醛水溶液（福尔马林）内加高锰酸钾等氧化剂后使用甲醛汽化，达到对空气和物品熏蒸的目的。甲醛灭菌时产生气体的方法有以下几种：
（1）多聚甲醛加热法：将多聚甲醛研成粉末，均匀铺在金属板上，加热至150℃以上即产生甲醛气体。多聚甲醛用量为每平方米10-20g，作用时间12-24小时。多聚甲醛产气量高，对室内相对湿度改变小，是较理想的方法。
（2）甲醛水溶液蒸发法：将40%甲醛水溶液（福尔马林）倒入蒸发皿中，加热蒸发。福尔马林的用量为每平方米25ml，作用时间12-24小时。
（3）氧化法：先将高锰酸钾放入一较大容器中，再倒入福尔马林，即氧化产生甲醛气体。福尔马林和高锰酸钾的用量为每平方米40ml和30g，作用时间以12-24小时为宜。如果为了增加空气的湿度可加入相当于福尔马林用量一半的水。
由于甲醛气体的穿透力差，故在熏蒸前应充分暴露物体表面，打开橱门，摊开或挂起物品。熏蒸时室内温度应在18℃以上，相对湿度为70%。甲醛气体对人体有毒,应在气体散尽后再进入室内工作。此外，4%-8%甲醛水溶液及8%甲醛乙醇溶液（用70%乙醇配制）可用于器械或物品的液体浸泡灭菌，作用6-18小时为宜。
2.环氧乙烷 环氧乙烷（ethylene oxide）气体具有广泛的杀菌作用，它不损害消毒物品，且穿透力强。主要用于消毒塑料用品、不耐高热高压以及不能受潮湿的物品。例如，培养板、塑料培养瓶皿、布类等。被消毒的物品可以用棉布或塑料薄膜包装后灭菌，大规模灭菌一般采用环氧乙烷灭菌袋进行。
由于环氧乙烷易燃易爆，放置和使用处应无火源，通风好，操作时应慎重，以免药液喷出或漏气，消毒后必须打开方可使用。环氧乙烷气体有毒，不可用于空气消毒。
3.乙醇 乙醇（ethanol）是一种应用广泛的消毒剂，消毒效果好，且对其他灭菌剂例如戊二醛、碘伏、氯已定（洗必泰）等有增效或协同作用。通常使用浓度为70%-75%的乙醇水溶液。由于乙醇不能杀死芽孢，所以，取材器械等物品一般不宜用乙醇浸泡消毒。此外，橡胶和塑料制品长时间接触乙醇会变硬。用75%酒精消毒塑料器皿的程序是：70%酒精浸泡过夜→灭菌三蒸水浸泡三次（10分钟/次）→无菌条件下晾干→紫外线照射1小时。
4.氯己定 氯己定，又称洗必泰（hibitane），化学名为1，6-双-（正-对氯苯双胍）-已烷，是广谱杀菌剂。其毒性低，刺激性小，不产生耐药性，是目前广泛应用的消毒剂之一。主要用于皮肤及创面消毒。用0.02%洗必泰的水溶液消毒（浸泡3分钟）及动物创面的洗涤消毒；用0.5%洗必泰的乙醇溶液（70%乙醇配制）擦手消毒和动物皮肤消毒。
5.戊二醛 戊二醛（glutaraldehyde）是一种广谱、高效灭菌剂。具有水溶液稳定、对金属腐蚀性小、低毒、安全等优点。通常用2%的碱性戊二醛溶液灭菌。配制方法：先将戊二醛原液稀释成2%（V/V）水溶液，再加入0.3%（W/V）NaHCO3，将溶液调至pH7.5～8.5，另加入0.5%亚硝酸钠可防锈和增效。用此溶液浸泡金属器械、温度计、橡皮和塑料管、塞等30分钟以上即可灭菌。灭菌后的物品须用无菌水冲洗。通常戊二醛溶液不会腐蚀和损坏上述物品，其溶液的表面张力低，容易穿透和洗去。
6.新洁尔灭 新洁尔灭，又称苯扎溴铵，其0.1%水溶液可对器械、皮肤、操作表面进行擦拭和浸泡消毒。
7.碘伏与碘酊 碘伏（iodophor）是一种广谱杀菌剂，能杀死细菌、芽孢、真菌、病毒等，且杀菌的速度很快，已在临床广泛使用。医用碘伏是聚烯吡咯烷酮-碘（PVP-I），可用于手消毒和手术野的皮肤消毒。也可将1%碘伏用于地面、台面及物品表面等的擦试或喷雾消毒。
碘酊又名碘酒(配制方法：20g碘、15g碘化钾(或碘化钠)、500ml95%乙醇、加水至1000ml)，主要用于皮肤消毒，皮肤经碘酒涂抹2～3次后，须用70%乙醇脱碘。
（三）抗生素消毒法
抗生素主要用于消毒培养用液，是培养过程中预防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不严重时的“急救”方法。不同抗生素杀灭的微生物不同，应根据需要进行选择。
可用于细胞培养的消毒灭菌方法虽然有多种，但每种消毒灭菌方法都有一定的适用范围。如常采用过滤除菌系统、紫外线照射、电子杀菌灯、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒实验室空气；多用来苏尔或新洁尔灭消毒实验室地面；常用干热、湿热、消毒剂浸泡、紫外线照射等方法消毒培养用器械；采用高压蒸气消毒或过滤除菌方法消毒培养液。
为了防止清洗器材已消毒与未消毒发生混淆，可在纸包装后，用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水，在包装纸上作一记号，平时这种墨水不带痕迹，一经高温，即出现字迹，从而可以判定它们是否消毒。密写墨水的配制：氯化钴(CoCｌ2•6H2O)2g,30%盐酸10ml，蒸馏水88ml。
1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，
须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇
至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中，定容到100ml。
100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹
或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl调pH至7.5，于-20℃贮存。（配制过程中要戴手套）
5mol/L氯化钠（NaCl）：溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。
10N氢氧化钠（NaOH）：溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10％SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。
100％三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）
2.5％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）：溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂（Denhardt's regent）
成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量
2%聚蔗糖（Ficoll，400型）
2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）
2%BSA（组分V）
水 2g
2g
2g
加水至总体积为100ml
依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量
0.5mol/L Tris-HCl
100mmol/L MgCl2
100mmol/L DTT
2mmol/L ATP
5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）
0.5mg/ml BSA（组分V）（可选）
水 5ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
1ml 1mol/L 贮液
200ul 100 mmol/L 贮液
50ul 1 mmol/L 贮液
0.5ml 10 mg/mL 贮液
2.25ml
将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。
100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）
可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液
成分及终浓度 配制20ul溶液各成分的用量
10mmol/L dATP
10mmol/L dCTP
10mmol/L dGTP
10mmol/L dTTP
水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液
2ul 100 mmol/L dCTP 贮液
2ul 100 mmol/L dGTP 贮液
2ul 100 mmol/L dTTP 贮液
12ul
20％PEG 8000/2.5M NaCl
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量
质量浓度为20％聚乙二醇
2.5mol/L 氯化钠
水 20g
50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠
补足100ml
加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）
3mol/L 氯化钠
水 88.2g
175.3g
补足1L
溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。
DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水
加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为0.1％。在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺（deionized formamide）
直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。
磷酸缓冲液（phosphate buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠（ml） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终pH值
877
850
815
775
735
685
625
565
510
450
390
330
280 123
150
185
225
265
315
375
435
490
550
610
670
720 6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
7.0
7.1
7.2
TE（用于悬浮和贮存DNA）
成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量
10mmol/L Tris－HCl
1mmol/L EDTA
水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25℃）
200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
98.8ml
Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积（ml） pH
8.6
14
21
28.5
38
46
56
66
71.3
76 9.0
8.8
8.6
8.4
8.2
8.0
7.8
7.6
7.4
7.2
电泳缓冲液
50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
2mol/L Tris碱
1mol/L 乙酸
100 mmol/L EDTA
水 242g
57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L）
200ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量
445 mmol/L Tris碱
445 mmol/L 硼酸盐
10 mmol/L EDTA
水 54g
27.5g 硼酸
20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0）
补足1L
染料
1％溴酚蓝（bromophenol blue）
加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）
溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）
小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。
凝胶上样液（gel loading solutions）
6×碱性凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.3 N 氢氧化钠
6 mmol/L EDTA
18％聚蔗糖（400型）
0.15％溴甲酚绿
0.25％二甲苯青FF
水 300ul 10N 氢氧化钠
120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.8g
15mg
25mg
补足到10ml
6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
15％聚蔗糖（400型）
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
1.5g
补足到10ml
6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.25％溴酚蓝
0.25％二甲苯青FF
15％聚蔗糖（400型）
水 2.5ml 1％溴酚蓝
2.5ml 1％二甲苯青FF
1.5g
补足到10ml
6×甘油凝胶上样液（4℃贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
50％甘油
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
3ml
3.9ml
6×蔗糖凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.15％溴酚蓝
0.15％二甲苯青FF
5 mmol/L EDTA
40％聚蔗糖
水 1.5ml 1％溴酚蓝
1.5ml 1％二甲苯青FF
100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0）
4g
补足到10ml
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝
0.2％二甲苯青FF
200 mmol/L EDTA
0.1％SDS
50％甘油
水 20mg
20mg
4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
100ul 10％ SDS
5ml
补足到10ml
LB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 10g
酵母提取物 5g
氯化钠 10g
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
SOB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 20g
酵母提取物 5g
氯化钠 0.5g
1 mol/L 氯化钾 2.5ml
用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。
SOC培养基
成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。
TB培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 12g
酵母提取物 24g
甘油 4ml
各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。
2×YT培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 16g
酵母提取物 10g
氯化钠 4ml
如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。
YPD培养基
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨 20g
酵母提取物 10g
葡萄糖 20g
用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。
氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）
溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）
溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）
溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）
溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
【配制方法】
把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液
【配制方法】
把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.182，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】
放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】
在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。
9．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2•6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
碱基 波长（nm） 消化系数（ε）[L/（mol•cm）]
A 259 1.54×104
G 253 1.37×104
C 271 9.10×103
T 260 7.40×103
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na•2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节 溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4•2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH调节 pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2•6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris•HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris•HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4•H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节 pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
微生物实验室常用的主要仪器有培养箱、干烤箱、普通冰箱、低温冰箱、离心机、超速离心机．高压灭菌器、滤器、水浴锅等。
一、培养箱
培养箱亦称恒温箱，是培养微生物的重要设备。使用时座注意的事项如下：
1．用前要检查其所需要的电压与所供应的电压是否一致，如不符合，则应使用变压器；
2．如内外夹壁之间须盛水，用前则需注入与所需要的培养温度相接近的温水，每过一定时间应换水一次，以保持水的清洁和恒定的量；不用时应将水放出；
3．初用时应检查温度调节器是否准确，箱内各部分的温度是否均匀一致；
4．除了取、放培养材料外，箱门应始终严密关闭；
5．经常观察箱上的温度计所指示的温度是否与所需要标准相符；
6．箱内外应保持清洁干燥。
二、干燥箱
也称干热灭菌器，其原理与培养箱相似，只是所用的温度较高。主要用途是供消毒玻璃器皿。干燥箱的使用方法及注意事项如下：
要消毒的玻璃器皿必须清洁、干燥，并包装好，放人干燥箱内，将门关紧。然后，按上电源，打开开关加热，使温度慢慢上升，当温度升至60～80℃左右，开动鼓风机，使灭菌器内的温度均匀一致，到所要的温度（通常为160～180℃）后维持一定的时间，通常为1．5～2小时，然后截断热源，待干燥箱内温度降到室温时方可将门打开（干燥箱内温度高于67℃时，不能将门打开取放器皿），取出灭菌物品。灭菌后玻璃器皿上的棉塞和包扎纸张应略呈淡黄色，而不应烤焦。
三、普通冰箱
冰箱系据据液体挥发成气体时需要吸热，而将其周围的温度降低这一原理设计而成的。可用的冷却液有氨、二氧化碳和二氯二氟甲烷（Cl2F2或称Freon弗里昂）等，这些物质液态时都容易气化，气化时吸收大量的热，稍加压力又易被液化。
应用电冰箱时应注意的事项如下：
1．购入冰箱时应注意冰箱所需要的电压是否与所供应的相符，如不符，则须用变压器，并注意供电线路上的负荷及保险丝的种类是否符合冰箱的需要；
2．冰箱应置于通风明凉的房舍内，并注意离墙壁要有一定距离；
3．使用时应将温度调节到所需要的温度，通常微生物实验室所用的冰箱，其下部应为4～10℃，而上部冷却室中应结冰6冷却室内的铝盘不可将水盛满，以免膨胀后将水溢出盘外；
4.冰箱开启时应尽量短暂，温度过高的物品不能放入冰箱中，以免过多的热气进入箱中而消耗电量，并增加其机件的工作时间，缩短使用寿命；
5．冰箱内应保持清洁干燥，如有霉菌生长，应先清理内部，然后用福尔马林气体熏蒸消毒。无论是冰箱内有霉菌生长或冷却室内结冰太多需要清理时，都应先将电路关闭，将冰融化后再行清理。
四、低温冰箱
其原理和普通冰箱一样。
各厂家生产的型号不同，一般的低温冰箱使用时注意事项如下：
1．购入冰箱时座注意低温冰箱所需要的电压是否与所供应的一致，应根据低温冰箱的要求调整电压，并注意供电线路上的负荷及保险丝的种类是否符合低温冰箱的要求；
2．低温冰箱宜放置在室内，四周至少离墙壁50厘米，并尽量远离发热体，空气流通，不受日光照射，环境温度宜低于35℃；
3．新购人低温冰箱试机时或因停电温度回升过高时，为了避免机器一次工作时间过长，应控制温度调节器，使甚逐渐下降；
4．冷凝结片间易受空气尘埃堵塞，影响冷凝效果，应经常注意清理；
5．整个制冷系统都是气密的，使用时不可随意紧松连接管子上的接头及压缩机上的螺钉，如怀疑有漏气的情况，可以用浓肥皂水检查，如确有漏气，接头处应拧紧；
6. 在环境温度与低温冰箱内温度差距大时，尽量缩短开房时间，一般使用情况下，每年要进行一次维修。
五、离心机
离心机是根据物体转动时发生离心力这一原理而制成的。在微生物实验室内，离心机可以用于沉淀细菌、分离血清和其他比重不同的材料而使用之。电动离心机的用法如下：
1. 将盛有材料的离心管置于离心机金属管套内，必要时可在管底垫一层棉花，天平上平衡，使相对两管连同其管套的重量相符，如仅有材料一管，则可盛清水于相对一管中以平衡之；
2. 将离心管及其套管按对称位置放入离心机转动盘中，将盖盖好；
3. 打开电源，慢慢转动速度调节器的指针至所要求的速度刻度上，维持一定时间。有的离心机在转动盘上装有玻璃管一根，从盖中央的小孔中突出于离心机外，管中盛酒精，当离心机转动时，固离心作用使酒精引起—个旋涡，从旋涡的深度即可显示转动速率；
4．到达一定时间后，将速度调节器的指针慢慢转回至零点，然后关闭电源；
5．等转动盘自行停止转动后，将离心机盖打开取出离心管。取出离心管时应小心；勿使已经沉淀的物质又因震动而上升；
6．使用离心机时，如发现离心机震动，且生杂音，则显示内部重量不平衡；若发现有金属音，则往往表示内部试管破裂，均应立即停止使用，进行检查。
六、超速离心机
超速离心机比一般离心机转速高，转速每分钟可达50000转以上，微生物实验室用作病毒的提纯，浓缩，测定沉降速率与病毒颗粒的大小和浮密度等。常用的有下列几种类型：
1．斜角离心机：离心转头大约与中轴成28度角，这种离心机效能较高，可用于沉降多种病毒。离心速率一般都以每分钟转速来计算。现在则以相对离心力“g”来计算：
g=1．18×10-5×R×N
R=离心机半径的厘米值，指从离心机中轴中心至离心机管顶端的距离。
N=离心机每分钟的转速。
按Stock方程式计算证明，在测定沉降速度时，有重大作用的是离心机速度平方值。虽然增大离心机的半径能提高沉降速度，但是如果加快离心机转速，则效果更显著，而且操作简便。可是最重要的是应该计算最高相对离心力（g），必须同时考虑离心机转头半径的作用。
2．涡轮型离心机属小型，是涡轮上载有翼片，受压缩空气的冲击而转动涡软，最高速度达50000～60000转／分钟，但仅可分离小量材料。
超速离心机型不同，各厂的产品也不完全一样，兹以英国“MSE”为例，说明一般超速离心机的使用方法。
（1）根据仪器使用说明和要求，安装时特别注意机体稳固，保持离心机转动在水平位置上。使用前应全面检查各项安装使用要求，若无问题方可启用；
（2）一个离心机有几个转头，根据需要和用途，选择合适的转头安装在转轴上；
（3）取出离心管和管套，装入所要离心的材料，在千分之一的天平上称量准确，再对应地放入转头中，盖好离心池上边的盖；
（4）调节离心池的温度控制器到所要求的温度、再接通电源，打开总开关，起动压缩机，当离心池温度到达要求的温度后，抽气机自动工作。这时把时间控制旋钮按反时针方向转动到“0”，速度控制旋钮转到起动和增速位置，再把控制离心机转动的旋钮转到自控或手控位置；
（5）当离心池抽成真空时，抽气机自停而转头自动起动，当离心速度到所需速度时，速度控制旋钮再转到维持速度，这时再把时间控制旋钮转到所需要的时间位置。
（6）离心时间到后，离心机自动减速停下来，离心池也进气后方可打开离心池盖，小心地取出离心管；
（7）工作完后，全面检查，切断电源。
七、电热恒温水浴锅
主要用于温演化学药品、融化培养基、灭能血清等。使用方法及注意事项如下：
使用时必须先加水于锅内，可按需要的温度加入热水，以缩短加热时间。接通电源，绿灯亮。锅内加温，红灯亮。观察温度计是否已升到所需要之温度。如锅内温度不够，而红灯已灭，应旋转调节器旋钮来进行调节。顾时针方向旋转，红灯亮，即接通锅内电热管使之加温；逆时针方向转动，红灯灭，即断电降温。如锅内温度和所需要的温度相差有限，要微微转动达到恒温。倘需要锅内水温达100℃作沸水蒸馏用时，可将调节旋钮至终点。但不可加水过多，以免沸腾时水量溢出锅外，并应注意锅内水量不能少于最低水位（即不能使锅内电热管露出水面），以免烧坏电热管。还要注意在锅内中的铜管内装有玻璃棒，作调节恒温用，切勿碰撞和剧烈振动，以免碰断内部之玻璃棒，使调节失灵。
八、高压灭菌器
是根据沸点与压力成正比的原理而设计的，其灭菌效果较流通蒸气灭菌器好．通常在15磅压力下灭菌15～20分钟可将一般细菌和芽胞完全杀死。
高压灭菌器的用法及其注意事项如下：
1．在器内加入适量的水，约近金属隔板处；
2．将灭菌物品包扎好，小心放于隔板上；
3．将盖盖好，扭紧螺旋，关切气门；
4．在灭菌器下加热，但勿使温度上升过骤，以免玻璃器皿破裂；
5．压力器指针上升至2～3磅（5磅以内）时徐徐打开气门，排出器内所存留的空气，直至排出的蒸气内不夹杂空气为止，然后关紧气门。
6．压力上升至15磅（或其他规定的磅数）时开始计时，并将热源调节至恰能维持所需要的压力为度，经过规定时间后撤去热源；
7．待器中压力自行降至零磅，方可将气门慢慢打开、放气．排气完毕后，开盖取出灭菌物品，气未排完前切不可开盖；
8．将器内的水放出，并作必要的清洁。
表附2-1 压力与沸点的关系
压力（磅） 沸点（℃） 压力（磅） 沸点（℃） 压力（磅） 沸点（℃）
1 102.3 9 114.3 17 123.30
2 104.2 10 115.6 18 124.30
3 105.7 141 116.8 19 126.20
4 107.3 12 118.0 20 128.10
5 108.8 13 119.1 21 129.3
6 110.3 14 120.2 22 131.5
7 111.7 15 121.3 23 133.1
8 113.0 16 122.4 24 134.6
九、流通蒸汽灭菌器
流通蒸汽灭菌器简称蒸气灭菌器，亦称阿诺德（Arnold）氏灭菌器，其原理系用流通蒸气而达到去菌的目的。这种灭菌器的温度最高达100℃，通常用于消毒不耐高热的材料如筋胶和含牛奶、糖类的培养基等。其用法如下：
1．加水于灭菌器的底槽内，由水孔进入盛水腔，水量以不淹没隔板为度；
2．置灭菌材料于内腔涵隔板上，将内外面层门关好；
3．在盛水腔下加热使生蒸气；
4．温度上升至一定程序（通常为沸点）后维持一定时间（通常为30分钟至1小时），然后将灭菌材料取出；
5.若用间歇灭菌法，则材料取出冷后，应放入温箱内使其中存在的芽孢发芽，第二天再灭菌一次，又复置温箱中使残余的芽孢发芽；第三天再灭菌一次，即将一般细菌芽孢和繁殖体完全杀死。
十、细菌滤器
滤器，又称细菌滤器，是微生物实验室中不可缺少的一种仪器，可以用来去除糖溶液、血清、腹水、某些药物等不耐热液体中的细菌，也可用采分离病毒以及测定病毒颗粒的大小等。
1．滤器的种类：常用的有伯克菲滤器、姜伯朗滤器、蔡氏滤器、玻璃滤器以及火棉胶和纤维素膜滤器等。
（1）伯克菲（Berkefeld）滤器用砂藻土制成，有金属接头，带负电荷，有三种：
V级是粗孔径（8～12μm），用于粗滤，排除一些细菌及悬液中的大颗粒。
N级是一种中号孔径（5～μm）能阻止大多数细菌，几乎可以滤过所有的病毒，最常用。
W级是孔径最细的（3～4μm），可阻留所有的细菌，也可以阻留70～150μm大的病毒。
（2）姜伯朗（Chambertand）滤器：由无釉瓷组成，为一整体，无金属接头，所
以不易有漏洞，是其优点。按孔径分九级：t1、L1Bir、L2、L3、L5、L7、L9、L11和L13，以L1孔径最大，L13最小。L1级相当于伯克菲滤器的V纸L3=N级，L13=W级
（3）蔡氏（Seitz）滤器是用金属器将石棉板夹在中间，作为滤过器使用。每次换一块石棉板，石棉板按孔径大小有两种：K型（粗）可作澄清用，EK型（细）能阻止细菌通过，如要减低其滤过性，一次可用两层石棉板。石棉板带阳电荷。
（4）玻璃滤器全部由玻璃制成，使用较方便，但滤孔易于堵塞是其缺点。孔径大小由0．5～250μm不等，分为G1、G2、G3、G4、G5、G6、六种规格。国产常用型号为G5、G6，均能阻挡细菌通过，常用它滤过病毒，G5孔径为1.5～2.5μm，G5孔径为1．5μm。
（5）滤过效率如何，取决于病毒的大小、病毒量的多少、滤器的孔径、滤器表面电荷的性质、病毒表面电荷的性质、抽滤时负压的大小、悬液的粘稠度、悬液的pH值以及滤过时间等因素。因此，要成功地进行滤过，必须事先了解滤器的性能和滤液的性质。由于影响过滤效率的因素比较复杂，所以一般滤过时多选用较病毒颗粒大些的滤孔滤器。
（6）过滤病毒悬液时，常遇到的困难是表面电荷的干扰，当病毒颗粒与滤膜表面电荷相异时，则病毒颗粒仅少部分通过滤膜，而大部被滤膜所吸附，致使病毒不能滤过。为了克服这个困难就必须加大病毒悬液的病毒浓度，否则滤过的病毒过少或不能滤过。
（7）将清洁的滤器、滤瓶等分别用纸包装后，15磅压力一次蒸气灭菌20分钟，以无菌操作法将滤器与滤瓶装妥，并使滤瓶的侧管与抽气机的抽气橡皮管相连（或中间安装压力计及缓冲空瓶）。倒入滤器液，开动抽气机，使滤瓶中压力渐减，滤液流入滤瓶或滤瓶内的试管内。滤毕，关闭抽气机。先将油气机的抽气橡皮管从滤瓶侧管处拨下，再开启滤成的橡皮塞。迅速以无菌操作，取出瓶中滤液，移放于无菌玻璃容器内。若滤瓶中装有试管，则将盛有滤液的试管取出加塞即可。
十一、冻干机
冻干机是供冻干菌种、毒种补体、疫苗、药物等使用的机器，主要由真空干燥机、真空泵、压力计、真空度检验枪等组成。冷冻真空干燥，即将保存的物质放在玻璃容器内，在低温中迅速冷冻，然后用抽气机抽去容器内的空气，使冰冻物质中的水分直接升华而干燥。这样，微生物在冻干状态下可以长期保存而不致失去活力。冷冻真空干燥机使用的方法如下
1．首先检查冻干系统各部件连接是否严密，将干燥剂（氯化钙、硫酸钙、五氧化二磷等）盛放干燥盘上；
2．将要冻干的物质，定量分装于无菌的安瓿内，每安瓿0．1～0．5ml，放于-20℃以下的低温冰箱中迅速冷冻10～30分钟；
3．将冻好的安瓿放在干燥剂上，关闭冻干机盖，打开抽气机连续抽气6～8小时，当压力降至0．2mm汞柱以下时，干燥即告完毕，关闭抽气机；
4．取出中燥剂上的安瓿，存放于干燥器内，待封口。将干燥后的安额取出八支安装在冻干机上的八个橡皮管上，打开抽气机约10～30分钟，安瓿内气压很快降至0.2mm汞柱以后，以细火焰在安施颈中央部封口。如此连续进行干燥和封口；
5．封口的安瓿，再用真空度检查枪在其玻璃面附近检查，呈现蓝紫色荧光者，表示合格；
6．工作完后，将冻干机内的干燥剂取出，重新干燥备用。
一、肉浸液肉汤
（一）成份
绞碎牛肉 500g
蛋白胨 10g
磷酸氢二钾 2g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000 ml
（二）制法 将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000ml，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7．4～7．6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30分。
（三）用途 一般细菌培养用。
二、营养琼脂
（一）成份
肉水 1000ml
蛋白胨 10g
磷酸氢二钾 1g
氯化钠 5g
琼脂 20～30g
（二）制法 先将琼脂剪碎，用冷水洗净后加入肉汤中，划线补充水分，加热溶化。校正pH7.4～7.6，用纱布夹棉花过滤至透明。分装中试管或三角瓶。高压灭菌121℃20分，灭菌后中试管摆成斜面。
（三）用途 一般细菌的分离培养，纯培养，观察菌落性状及保存菌种用。为特殊培养基的基础。
三、鲜血琼脂
（一）成份
营养琼脂
脱纤维鲜血（马、绵羊、牛、家兔）5～8％。
（二）制法 将灭菌的营养琼脂加热溶化，冷至45～50℃时，加入无菌脱纤维鲜血5～8％，分装试管，即摆成斜面或倾注平皿，待凝固后，置37℃培养1日，有污染者废弃，无菌者保存于冰箱备用。
无菌脱纤维鲜血：以无菌手术采取健康动物（马、绵羊、牛用颈静脉采血、家兔用心脏采血）血液，加到盛有玻璃殊的三角瓶内，摇匀5～10分钟，置冰箱中备用。
（三）用途 用于分离培养和保存菌种。
四、半固体培养基
（一）成份
肉汤培养基（pH7.4～pH7．6） 100 ml
琼脂 0.3g
（二）制法 将琼脂加入肉汤培养基中加热溶化，校正pH至7．6，滤过后分接于试管内，以15磅高压灭菌20～30分钟，作成高层，经无菌检查合格后，置冰箱中保存备用。
（三）用途 菌种保存，观察细菌的运动性。
五、明胶培养基
（一）成分
普通肉汤 100 ml 明胶 12～15g（冬天少用，夏天多用）
（二）制法 将上述成分加热溶化，校正pH至7．6，趁热过滤，分装试管，用8磅15分钟灭菌或流通蒸气100℃，30分钟间歇，灭菌，经无菌检验合格的保存于冰箱内备用。
六、乳糖胆盐发酵培养基
（一）成份
蛋白胨 20g
猪胆盐（或牛、羊肠盐） 5g
乳糖 10g
0.04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH7．4，加入指示剂，分装每管10ml，并先放入一个小例立的管，115℃高压灭菌15分钟。
注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
七、乳糖发酵培养基
（一）成份
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH7．4，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并放入一个倒立的小管，115℃高压灭菌15分钟。
注：1、双料乳糖发酵除蒸馏水外，其他成分加倍。
2、30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3ml乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
八、缓冲蛋白胨水（BP）
（一）成份
蛋白胨 10g
磷酸二氢钾 1．5g
磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O） 9g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 按上述成分称好后，装入大烧瓶，121℃高压灭菌15分钟。用时无菌分装，每瓶225ml。
注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
九、氯化镁孔雀绿增菌液（MM）
（一）成份
1．甲液：
胰蛋白胨 5g
氯化钠 8g
磷酸二氢钾 1.6g
蒸馏水 1000ml
2．乙液：
氯化镁（化学纯） 40g
蒸馏水 100ml
3．丙液: 0.4％孔雀绿水溶液
（二）制法分别按上述成分配好后，121℃高压，灭菌15分钟备用。临用时取甲液90ml、乙液9ml、丙液0.9ml，以灭菌操作混合即可。
注：本培养基亦称Rappaprt10（R10）增菌液。
十、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）
（一）成份
1．基础培养基
肠胨 5g
胆盐 1g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 30g
蒸馏水 1000 ml
2．碘溶液
碘 6g
碘化钾 5g
蒸馏水 20ml
（二）制法 将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100ml。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15分钟临用时每100ml基础培养基中加入碘溶液2ml、0．1％煌绿溶液1ml。
十一、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）
（一）成份
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸二氢钾 5.5 g
磷酸二氢钾 4.5g
L—胱氨酸 0.01g
蒸馏水 1000ml
1％L—胱氨酸—氢氨化钠溶液的配法：称取L—胱氨酸0．1g（或DL—胱氨酸0．2g），加1N氢氧化钠1．5ml，使溶解，再加入蒸馏水8．5ml即成。
（二）制法 将除亚硒酸氢钠和L—胱氨酸以外的各成份溶解于900ml蒸馏水中，加热煮沸，冷却后备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100ml蒸馏水中，加热煮沸，冷却后以无菌操作与上液混合。再加入1％L—胱氨酸—氢氧化钠溶液1ml。分装于灭菌瓶中，每瓶100ml，pH应为7．0±0．1。
十二、GN增菌液
（一）成份
胰蛋白胨 20g
葡萄糖 1g
甘露醇 2g
柠檬酸钠 5g
去氧胆酸钠 0.5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 按上述成分配好，加热使溶解，校正pH7.0。分装每瓶225ml，115℃高压灭菌15分钟。
十三、肠道菌增菌肉汤
（一）成份
蛋白胨 10g
葡萄糖 5g
牛胆盐 20g
磷酸氢二钠 8g
磷酸二氢钾 2g
煌绿 0.015g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 按上述成分配好，加热使溶解，校正pH7．2。分装每瓶30ml，115℃高压灭菌15分钟。
十四、HE琼脂
（一）成份
1. 基础液:
肘胨 12g
牛肉膏 3g
乳糖 12g
蔗糖 12g
水杨苷 2g
胆盐 20g
氯化钠 5g
琼脂 10g～20g
0.4％溴 香酚蓝溶液 16ml
蒸馏水 1000ml
2. Andrade指示剂:
酸性复红 0.5g
1N氢氧化钢溶液 16ml
蒸馏水 100ml
将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2ml。
3. 甲液:
硫代硫酸钠 34g
柠檬酸铁铵 4g
蒸馏水 100ml
4. 乙液:
去氧胆酸钠 10g
蒸馏水 100ml
（二）制法 将前面八种成分溶解于400ml蒸馏水内作为基础液，将琼脂加入于600ml蒸馏水内，加热溶解。加入甲液20ml和乙液20ml于基础液内，校正pH7.5。再加入Andrade指示剂20ml，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。
注：此培养基不可高压灭菌
十五、SS琼脂
（一）成份
1．基础培养基
牛肉膏 5g
肘胨 5g
三号胆盐 3.5g
琼脂 17g
蒸馏水 1000ml
制法：将牛肉膏、肘胨和胆盐溶解于400ml蒸馏水中，将琼脂加入于600ml蒸馏水中，煮沸使其溶解，再将二液混合，121℃高压灭菌15分钟，保存备用。
2．完全培养基
基础培养基 1000ml
乳糖 10g
柠檬酸钠 8.5g
硫代硫酸钠 8.5g
10％柠檬酸铁溶液 10ml
1％中性红溶液 2.5ml
0．1％煌绿溶液 0.22ml
制法：加热溶化培养基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正pH7．0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。
注：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48小时内使用。
②煌绿溶液配好后应在10天以内使用。
③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
十六、麦康凯琼脂
（一）成份
蛋白胨 17g
肘胨 3g
猪胆盐（或牛、羊胆盐） 5g
氯化钠 5g
琼脂 17g
乳糖 10g
0．01％结晶紫水溶液 10ml
0．5％中性红水溶液 5ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法
1．将蛋白胨、肘胨、胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，校正至pH7.2。将琼脂加入于600ml蒸馏水中，加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高灭菌15分钟备用。
2．临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖。冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
十七、伊红美蓝琼脂（EMB）
（一）成份
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2％伊红y溶液 20ml
0．65％美蓝溶液 10ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH7．1，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15分钟备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷却至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
十八、三糖铁琼脂
（一）成份
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵[Fe（NH4）2（SO4）2•6H2O] 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
酚红 0.025g
琼脂 12g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将除琼脂和酚红以外的各成份溶解于蒸馏水中，pH7．4。加入琼脂，加热煮沸，以融化琼脂。加入0．2％酚红水溶液12．5ml，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15分钟。放置高层斜面备用。
十九、三糖铁琼脂（换用方法）
（一）成份
蛋白胨 15g
肘胨 5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁 0.2g
疏代硫酸钠 0.3g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中校正pH7．4。加入琼脂，加热煮沸，以融化琼脂。加入0．2％酚红水溶液12．5ml，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15分钟，放置高层斜面备用。
二十、血消化汤
（一）成份
绞碎猪胃 100g
绞碎猪血块 100g
磷酸二氢钾 1g
2N碳酸钠溶液 50ml
浓盐酸 10ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法
1．洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机续碎。
2．用绞肉机将猪血块绞碎。
3．将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24小时，常加以摇动。
4．从水浴锅内取出，加入2N碳酸钠液5ml，煮沸10分钟，置于冰箱内一夜。
5．吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入2N碳酸钠溶液45ml，煮沸，校正pH7．2～7．4。
6．用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20分钟。
注：①本培养基不含糖可供作鉴别培养基的基础，不需加蛋白胨和氯化钠。
②2N碳酸钠溶液的配法：无水碳酸钠10．6g，溶于1000ml蒸馏水中。
二十一、克氏双糖铁琼脂（KI）
（一）成份
下层：
血消化汤（pH7．6） 500ml
琼脂 2g
葡萄糖 1g
0．2％酚红溶液 5ml
上层：
血消化汤（pH7．6） 500ml
琼脂 6.5g
硫代硫酸钠 0.1g
硫酸亚铁按 0.1g
乳糖 5g
0．2％酚红溶液 5ml
（二）制法
1．取血消化汤按上层和下层的琼脂用量，分别装入琼脂，加热溶解。
2．分别加入其他各种成分。将上层培养基分装于烧瓶内；将下层培养基分装于灭菌试管内，（12×100mm），每管约2ml。10磅高压灭菌15分钟。
3．将上层培养基放在56℃水浴箱内保温；将下层培养基直立放在室温内，使其凝固。
4．俟下层培养基凝固后，以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面，每管约1.5ml，放成斜面。
二十二、克氏双糖铁琼脂（换用方法）
（一）成份
蛋白胨 20g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
柠檬酸铁铵 0.5g
疏代硫酸钠 0.5g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH7．4。加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0．2％酚红水溶液12．5ml，摇匀。分装试管，装量宜多些，以便得到比较高的底层。121℃高压灭菌15分钟。放置高层斜面备用。
二十三、动力—硝酸盐培养基（A法）
（一）成份
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
硝酸钾 1g
琼脂 3g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 加热溶解，校正pH7．0。分装试管，每管10ml，121℃高压灭菌15分钟。
二十四、动力—硝酸盐培养基（B法）
（一）成份
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
硝酸钾 5g
磷酸氢二钠 2.5g
半乳糖 5g
甘油 5g
琼脂 3g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将上各成份混合，加热溶解，校正pH7．4。分别装试管，121℃高压灭菌15分钟。
二十五、马丁氏肉汤
（一）成份
猪胃 数个 过滤清水（普通水） 150ml
纯盐酸 15ml
（二）制法
取猪胃去掉筋膜及脂肪，以绞肉机绞碎，每300g猪胃加盐酸15ml，过滤水150ml，于50℃消化24小时（每小时搅拌1～2次），取出后加热至80℃，使消化作用停止，并用NaOH中和，调PH至7．2，用滤纸过滤，分装试管或小三角烧瓶，15磅高压15分钟灭菌。
二十六、察氏培养基
（一）成份
硝酸钠 3g
磷酸氢二押 1g
梳酸镁（MgSO4•7H2O） 0.5g
氯化钾 0.5g
硫酸亚铁 0.01g
蔗糖 30g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 加热溶解，分装后121℃灭菌20分钟。
（三）用途 青霉、曲霉鉴定及保存菌种用。
二十七、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）
（一）成份
马铃薯（去皮切块） 300g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将马铃薯去皮切块，加1000ml蒸馏水，煮沸10～20分钟。用纱布过滤加蒸馏水至1000ml。加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20分钟。
（三）用途：分离培养霉菌。
二十八、马铃薯琼脂
（一）成份
马铃薯（去皮切块） 200g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 同马铃薯葡萄糖琼脂。
（三）用途 鉴定霉菌用。
二十九、Elek氏培养基（毒素测定用）
（一）成份
肘胨 20g
麦芽糖 3g
乳糖 0.7g
氯化钠 5g
琼脂 15g
40％氢氧化钠溶液 1.5ml
蒸馏水 1000ml
（二）制法 用500ml蒸馏水溶解除琼脂外的成份，煮沸，并用滤纸过滤。用1N氢氧化钠校正pH7．8。用另外500ml蒸馏水加热溶解琼脂。将两液混合，分装试管10ml或20ml。121℃
高压灭菌15分钟。临用时加热溶化琼脂倾注平板。
三十、胰蛋白胨水
（一）成份
胰蛋白胨 10g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 将上述成份溶解，校正pH7．0。分装试管，121℃高压灭菌15分钟。
三十一、3．5％氯化钠三糖铁琼脂
（一）成份
三糖铁琼脂 1000ml
氯化钠 30g
（二）制法 按本附录十八或十九配制三糖铁琼脂，再加入氯化钠30g，分装试管，121℃高压灭菌15分钟。放置高层斜面备用。
三十二、牛肉（或牛心）消化汤
（一）成份
绞碎牛肉（或牛心） 1000g
15％氢氧化钠溶液 27ml
胰蛋白酶 40ml
氯仿 1ml
氯化钠 10g
蒸馏水 200ml
（二）制法
1．称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15分钟；
2．加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷却至40℃；
3．加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5小时，每小时摇动一、二次；
4．4小时后，吸取上层液5ml于试管中，加1％硫酸铜溶液0.1ml、4％氢氧化钠溶液5ml，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出；
5．加入15％乙酸溶液45ml，对pH试纸呈酸性；
6．煮沸15分钟，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜；
7．次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸；
8．校正pH7.0～7.6（加15％氢氧化钠液约10ml）加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20分钟。
注：①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需要加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500ml，蒸馏水1500ml，混合之，装入玻塞瓶内。
每日摇匀三次，三天后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0．05％，放冰箱内保存备用。
三十三、0.1％蛋白胨水稀释剂
（一）成份
蛋白胨 1g
蒸馏水 1000ml
（二）制法 溶解蛋白胨于蒸馏水中，校正pH至7.0，121℃灭菌15分钟。
微生物实验室内应用的玻璃器材种类甚多，如吸管、试管、烧瓶、培养皿、培养瓶、毛细吸管、载玻片、盖玻片等，在采购时应注意各种玻璃器材的规格和质量，一般要求能耐受多次高热灭菌，且以中性为宜。玻璃器皿用前要经过刷洗处理，使之干燥清洁，有的需要无菌处理。对于每个从事微生物工作的人员应熟悉和掌握各种玻璃器皿用前用后的处理。现将玻璃器皿的种类及其准备列述如下：
一、常用玻璃器皿的种类及要求
（一）试管 用于细菌及血清学试验的试管应较坚厚，以便加塞不致破裂。常用的规格有：
1.2～3×65mm， 用于环状沉淀试验；
2.11～13×100mm，用于血清学反应及生化试验等；
3.15×150mm，用于分装5～10ml的培养基及菌种传代等；
4.25×200mm，用于特殊试验或装灭菌滴管等。
（二）三角烧瓶 底大口小，放置平稳，便于加塞，多用于盛培养基、配制溶液等。常用的规格有50、100、150、250、500、1000、2000、3000、5000ml等。
（三）培养皿为硬质玻璃双碟，常用于分离培养。盖与底的大小应合适。盖的高度较底稍低，底部平面应特别平整。常用的规格（以皿盖直径计）有：90mm，75mm，60mm等。
（四）吸管 用于吸取少量液体。常用的吸管有两种；一种为无刻度的毛细吸管；另一种为有刻度吸管。管壁有精细的刻度。一般长为25厘米。常用的容量为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0及10ml。
（五）量简、量杯 用于液体的测量。常用规格为：10、20、25、50、100、200、500、1000及2000ml。
（六）烧杯 常用的规格50～3000ml容量，供盛液体或煮沸用。
（七）载玻片及盖玻片，载玻片供作涂片用，常用的规格为75×25mm，厚度为1～2mm。另有凹玻片可供作悬滴标本及作血清学试验用。盖玻片为极薄的玻片，用于标本封闭及悬滴标本等。有圆形的，直径18mm；方形的18×18或22×22mm；长方形的22×36mm等数种。
（八）离心管 常用规格有10、15、100及、250ml等数种，供分离沉淀用。
（九）试剂瓶 有磨纱口，有盖，分广口和小口两种，容量自30～1000ml不等，视需要量选择使用。分棕色、无色两种，为贮藏药品和试剂用，凡避光等药品试剂均宜用棕色瓶。
（十）玻璃缸 缸内常颈置石炭酸或来苏儿等清毒剂，以备放置用过的破片、吸管等。
（十一）染色缸 有方形和圆形两种，可放载玻片6～10片，供细菌、血液及组织切片标本染色用。
（十二）滴瓶 有橡皮帽式管滴和玻塞式，分白色和棕色，容量有30ml和60ml等，供贮存试剂及染色液用。
（十三）漏斗 分短颈和长颈式两种。漏斗直径大小不等，视需要而定。分装溶液或上垫滤纸或纱布、棉花作过滤杂质用。
（十四）注射器 有0．25ml、0．5ml、1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml和100ml等。供接种试验动物和采血用。
（十五）下曰瓶 有龙头和无龙头两种。容量有2500～20000ml不等。存放蒸馏水或常用消毒药液，也可作细菌涂片染色时冲洗染液用。
除上述外，还有发酵管、玻璃棒、酒精灯、玻璃珠以及蒸馏水瓶等玻璃器材。
二、一般玻璃器皿的准备
（一）新购入玻璃器皿的处理，新购玻璃器皿常附有游离碱质，不可直接使用，应先在2％盐酸溶液中浸泡数小时，以中和碱性，然后用肥皂水及洗衣粉洗刷玻璃器皿之内外，再以清水反复冲洗数次，以除去遗留的酸质，最后用蒸馏水冲洗。
（二）用后玻璃器皿的处理，凡被病原微生物污过的玻璃器皿，在洗涤前必须进行严格的消毒后，再行处理，其方法如下：
1．一般玻璃器皿（如平皿、试管、烧杯、烧瓶等）均可置高压灭菌器内15磅20～30分钟灭菌。随即趁热将内容物倒净，用温水冲洗后，再用5％肥皂水煮沸5分钟，然后按新购入产品的方法同样处理。
2．吸管类使用后，投入2％来苏儿或5％石炭酸溶液内48小时，以使其消毒，但要在盛来苏儿溶液的玻璃简底部垫一层棉花，以防投入吸管时损破。吸管洗涤时，先浸在2％肥皂水中1～2小时，取出，用清水冲洗以后再用蒸馏水冲洗。
3．载玻片与盖玻片用过后，可投入2％来苏儿或5％石炭酸溶液，取出煮沸20分钟，用清水反复冲洗数次，浸入95％酒精中备用。
各种玻璃器材若用上述方法处理，尚未达到清洁目的，则可将其浸泡于下述清洁液中过夜，取出后用水反复冲洗数次，最后用蒸馏水冲洗。
附：清洁液的配制方法
重铬酸钾 60g 硫酸 60ml
自来水 100ml
此液可连续使用，直至液体变绿后不再使用。此种清洁液内含有硫酸，腐蚀性很强，使用时应注意对衣服和皮肤的灼损。
凡含油脂如凡士林、石腊等的玻璃器材，应单独进行消毒及洗涤，以免污染其它的玻璃器皿。这种玻璃器材于未洗刷之前须尽量去油，然后用肥皂水煮沸趁热洗刷，再用清水反复冲洗数次，最后用蒸馏水冲洗。
（三）玻璃器皿的干燥 玻璃器材洗净后，通常倒置于干燥架上，令其自然干燥，必要时亦可放于干烤箱中50℃左右烤干，以加速其干燥，温度不宜太高，以免玻璃器皿碎裂。干燥后以干净的纱布或毛巾拭去干后的水迹，以备作进一步处理应用。
（四）玻璃器皿之包装 玻璃器皿在消毒之前，须包装妥当，以免消毒后又为杂菌所污染。
1. 一般玻璃器材（试管、三角瓶、烧杯等）的包装，用做好适宜大小的棉塞，将试管或三角烧瓶口塞好，外面再用纸张包扎，烧杯可直接用纸张包扎；
2．吸管的包装用细铁丝或长针头塞少许棉花于吸管口端，以免使用时，将病原微生物吸入口中，同时又可滤过从口中吹出的空气。塞进的棉花大小要适度，太松太紧对其使用都有影响。最后，每个吸管均需用纸分别包卷，有时也可用报纸每5～10支包成一束或装入金属简内进行干烤灭菌；
3．培养皿、青霉素瓶、乳钵等包装，用无油质的纸将其单个或数个包成一包，置于金属盒内或仅包裹瓶口部分直接进行灭菌。
附：棉塞的制作：制作棉塞，最好选择纤维长的新棉花，绝不能用脱脂棉，其制法视试管或瓶口的大小取适量棉花，分成数层。互相重叠，使其纤维纵横交叉，然后，折叠卷紧，用两层纱布捆系结实，做成长约4～5cm的棉塞。良好的棉塞上下粗细一样，并且与管口紧接，没有可见空隙。
（五）玻璃器材的灭菌，玻璃器材干燥包装后，均置于干热灭菌器内，调节温度至160℃维持1～2小时进行灭菌，灭菌后的玻璃器材，须在1周内用完，过期应重新灭菌，再行使用。必要时，也可将玻璃器材用油纸包装后，用121℃高压蒸气灭菌20～30分钟。
三、供组织培养用的璃破器皿及其它器皿的清洗、包装与消毒
（一）清洗 不论新购置的或用过的玻璃器皿，都必须首先浸泡于粗硫酸（有的实验室用清洁液）中过夜（清洁液的配方是：先将102克重铬酸钾与常水100ml相混合，加热使成饱和溶液，然后按每35ml饱和溶液加粗制浓硫酸1000ml即成），次日取出用自来水浸泡4～6小时后，再用自来水冲洗10次（不得少于10次）或用流水冲洗5分钟（清洁液浸饱的应适当延长）；最后蒸馏水冲洗6次（双蒸馏水冲洗3次即可，放入温箱中干燥即可包装。
（二）包装 吸管和移液管首先在管口塞入普通棉花少许（不得过紧或过松），用麻纸包扎后，装入玻璃简灭菌；培养瓶在塞好软木塞后，外面用牛皮纸包扎；平皿分别用牛皮纸包裹；中试管以4～6支用方形牛皮纸包裹在一起，进行灭菌。代用的链霉素小瓶，可直接放人铝饭盒内灭菌。
（三）灭菌 包装好的玻璃器皿，均以于热灭菌，100℃维持2～3小时。灭菌过的器皿，必须在一周内用完，过期应重新灭菌。
（四）翻口橡皮塞的准备，一般经肥皂水煮沸20分钟后，流水冲洗10次，再以蒸馏水冲洗2次后，用双蒸馏水浸泡于玻璃缸中备用。使用前煮沸消毒15分钟，亦可取出晾干包装高压灭菌灭菌后使用。
四、毛细管的制备
取直径5mm长约10厘米的中性硬质玻璃，两端各塞以棉花，包扎灭菌后两手持管之两端，将其中段置于喷灯上烧灼，待其赤热熔化时，即离开火焰，向两端抽长，即成毛细管。
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