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细胞中的微丝染色及微丝与细胞形态的实验观察

标签: 微丝 染色 细胞形态

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一、成纤维细胞微丝的染色及其对细胞松驰素B的反应

(一)原理

微丝普遍存在于多种细胞,对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合,从而破坏微丝,改变细胞的形状。

(二)细胞松驰素B处理成纤维细胞与染色观察

1、在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片,在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养,用作对照。

2、在有两片的平皿内加100μg/ml的细胞松弛素B 4滴继续培养半小时。

3、将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做染色处理,另一张用培养液洗五次(在平皿内换五次培养液,每次都要摇动),继续培养、观察。两小时后细胞形状恢复,接近正常。

4、对恢复的盖片与第一张没用药的盖片一同做染色处理。

5、染色处理

①将需染色的盖片放入盛有PBS的平皿内用吸管轻轻吹洗盖片,换液三次,每次3分钟,洗去培养液。

②将盖片移入2%Triton X-100液,置37℃恒温箱内处理20~30分钟,以提取骨架以外的蛋白质,使骨架图像清晰。

③立刻将盖片移入M-缓冲液,换洗三次,每次3分钟。M一缓冲液有稳定细胞骨架的作用。

④将盖片移入3%戊二醛固定15分钟。

⑤将盖片移入0.2%考马斯亮兰染液中,染色15分钟。然后小心地用自来水冲洗,空气干燥。

(三)结果

光镜观察,微丝聚集成的张力纤维束被染成蓝色。在没用药的标本上,成纤维细胞多数有突起,微丝沿突起规则排列;用细胞松驰素B处理的标本,由于微丝被破坏突起缩回,多数细胞形状变圆;用药处理后又洗去药的标本,由于解除了药的作用,肌动蛋白重新聚台形成微丝,细胞形状恢复正常。

二、丽藻细胞内胞质环流及其对细胞松弛素B的反应

(一)原理

丽藻细胞大,整个细胞的中央为大液泡占据。靠近液泡是一层溶胶样流动的内质,在内质与质膜之间,为静止的外质,其中含有叶绿体。内质中含有许多颗粒,可以清楚地看到胞质环流。在丽藻细胞中的微丝与胞质环流有密切关系。成束的微丝出现在外质与内质接口(溶胶和凝胶接口)并交织一起,与环流方向平行。用细胞松弛素B处理后,就可抑制胞质的环流运动。

(二)方法

1、剪下一小块丽藻叶片(1~2cm),置于载片上,盖上盖片。

2、观察(阳光充足时效果较好)。

3、再取一块丽藻叶片,滴一滴细胞松弛素B,10~15分钟后盖上盖片,观察。

4、洗去药物,再观察。

(三)结果

在丽藻内质中可以看到胞质环流,用细胞松弛素B处理后,胞质环流停止,洗去药物,又出现胞质环流。

三、微丝的电镜照片观察

恒河猴脊髓内神经纤维中微丝电镜照片,可见微丝是实心结构,直径5~8cm,它均匀地分散于细胞基质中,或排列成束和网状。

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