【求助】ELISA测细胞上清肿瘤坏死因子TNF-a

参与者：juaden

我做体外细胞实验看某种药物刺激下小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-a的量

买的是BIO-source的ELISA试剂盒

标准曲线很正常

但是挑选LPS作为阳性对照 阳性结果很不明显 几乎就是空白值

请教做过的老师同学 LPS浓度和刺激时间有什么特别的要求么？

还有 细胞上清测之前需要特殊处理么？如蛋白酶灭活之类的

谢谢！

参与者：sandy99

1、LPS刺激浓度不同的文献有所不同，看下来，较常用的是20ng-200ng，可能不同厂家的活性不太一样，建议LZ可以做量效确定LPS的工作浓度。

2、刺激时间一般6小时就够了。

3、一般来说标准曲线能做出来，试剂盒的问题较小。

4、测之间上清液没做特殊处理。

5、我们用ELISA法做TNF还是比较顺利的，但Western blot做不出来，也是找不到原因。