内参是看家基因.我们一般用bate-actin,有时也用GAPDH 它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都要做,跑出的条带进行灰度分析,用目的基因的积分光密度比上内参的光密度就是你这个基因实际表达的量. 内参的选择,普通PCR内参的大小没有多大要求,但real time一般选择300bp以下 |
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