1、96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。

2、去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。

3、37℃，孵育1～4h。

4、加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。

5、在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。