1、倒掉培养液,用D-HANKS洗两次

2、加入0.125％胰酶/0.02％EDTA（1：1），盖满瓶底为宜。

3、将培养瓶放置显微镜下进行观察，发现细胞间隙增大，突起回缩后竖起培养瓶，倒掉消化液。

4、用D-HANKS洗一次，此时动作要轻

5、加入完全培养液，轻轻吹打混匀，接种至培养瓶中。

注意：

1、0.125％胰酶/0.02％EDTA的PH值和温度重要，即PH值（7.5），温度

（37℃）

2、如果消化速度过快，细胞掉下来，也不要紧，加D-HANKS或完全培养液终止消化，离心1000r/min，10分钟即可

3、轻轻吹打