一、用途

本试剂盒用于定量检测大鼠血清中的IL-6的浓度。

二、原理

本试剂盒采用双抗夹心ELISA法。抗大鼠IL-6单抗包被于酶标板上，大鼠标本中的IL-6会与单抗结合。加入生物素化的抗大鼠IL-6（二抗），它将与结合在单抗上的大鼠IL-6结合而形成免疫复合物，未结合的将被洗去。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin 将与二抗的生物素结合，多余的物质会被洗掉。加入TMB显色。大鼠IL-6的浓度与OD(450nm)成正比。

三、试剂盒组成

酶标板(Coated Wells)

48wells

Anti-rat IL-6RBiotin

1 vial

浓缩洗涤液(100X)(Washing Concentrate)

5ml

标准品(Standards)

1 vial

显色液(TMB Substrate)

6ml

标准品稀释液(Standard Diluent)

7ml

终止液(Stop Solution)

5ml

浓缩酶联物（HRP）

1 vial

酶联物稀释液(HRP Diluent)

7ml

生物素稀释液(Biotin Diluent)

7ml

四、需要但未提供的材料

1、 可在450nm处进行读数的酶标仪；

2、 能精确吸取10-200µL的移液器；

3、 可调多道（8）移液器（50－200µL）；

4、 供可调多道移液器使用的试剂存放槽；

5、 洗瓶或洗板机；

6、 蒸馏水或去离子水；

7、 1升的圆柱形量筒；

8、 血清移液器：1和（10或25 mL）；

9、 移液器枪头；

10、 纸巾；

11、 计时器，用以监控温育步骤；

12、 处理池和消毒剂（例如：0.5% 次氯酸钠， 10% 家用漂白水）；

五、注意事项

1、 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2、 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3、 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4、 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5、 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6、 在储存和温育时避免强光直接照射。

7、 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8、 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9、 不能使用过期产品。

10、 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

六、保存

贮藏于2-8°C.

样品：

在此检测中，可使用血清样品。

七、准备工作

1、 浓缩洗涤液(100X)用双蒸水稀释成1X（至1000ml）。

2、 标准品用1ml标准品稀释液复溶。得到10ng/ml的高浓度标准品。高浓度标准品可保存于-20°C.

3、 将10ng/ml的高浓度标准品稀释成一组标准品，如： 5, 2.5, 1.25, 0.625,0.3125, 0ng/ml.

4、 配制1x HRP：一支 HRP加入6 ml 酶联物稀释液，混匀。1x HRP最好在临用前15分钟配制。

5、 配制1x Biotin：一支Biotin anti rat IL-6加入6 ml Biotin稀释液，混匀。1x Biotin最好在临用前15分钟配制。

八、操作步骤

试剂盒应平衡至室温（20-25°C ）再试验。

取出所需反应板，临用前15分钟配制工作液

1、 加入100ul标准品(Standards)、100ul血清于相应反应板孔中。

2、 轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育 60分钟。

3、 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。

4、 每孔加入100ul 1x Biotin.轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育 60分钟

5、 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。

6、 每孔加入100ul 1x HRP.轻轻混匀30秒，封住板孔，37°C温育 30分钟

7、 洗板：甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板（每孔内加入350ul洗涤液），并去除水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；反复洗涤5次。

8、 每孔加入100ul TMB显色液， 轻轻混匀10秒，37°C暗处温育15±10分钟。

9、 每孔加入100ul终止液（Stop Solution)。轻轻混匀30秒；30分钟内在450nm处读OD值。

以OD值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

九、举例

十、注意事项

1、 作标准曲线时，要扣除标准品稀释液造成的本底；如果标本用标准品稀释液稀释，也要扣除标准品稀释液造成的本底，如果标本未用标准品稀释液稀释，标本不需扣除标准品稀释液造成的本底。

2、 生物素(Biotin anti rat IL-6) 和浓缩酶联物(HRP)用前应离心，使液体位于管底。