电化学发光免疫分析法，Electro-Chemiluminescence Immunoassay (ECLI)

电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施加一定波形的电压或电流信号进行电解反应的产物之间或与体系中共存组分反应产生化学发光的现象。

电致化学发光（ECL)

ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。因此ECL反应易精确控制，具有灵活性。

电化学发光免疫分析法

电化学发光剂

定义：指通过在电极表面进行电化学反应而发出光的物质。

特点：
反应在电极进行
化学发光剂：三联毗啶钌
电子供体为：三丙胺（TPA）
三联毗啶钌分子结构图
三联吡啶钌（ [Ru(bpy)3]2+ ）特点

ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作为标记物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羟基琥珀酸胺酯（NHS） ，该衍生物具有水溶性，且高度稳定，保证电化学发光反应的高效和稳定，而且避免了本底噪声的干扰。

三联吡啶钌（ [Ru(bpy)3]2+ ）特点
[Ru(bpy)3]2+衍生物与免疫球蛋白结合的分子比超过20仍不会影响抗体的可溶性和免疫活性；
[Ru(bpy)3]2+分子量小，空间位阻小 ，即便小分子的核酸也能标记，使检测的菜单大大丰富，更重要的是为其检测菜单的开发前景提供了广阔空间。

电化学发光原理图

ECLI是继EIA、RIA、FIA、时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后的新一代标记免疫测定技术；
ECLI是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物；
ECLI是目前最先进的标记免疫测定技术之一。

ECLI原理
在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。

方法评价
采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 μm的聚苯乙烯微粒。其特点是反应面积比板式扩大20－30倍，吸附效率高；在液体中形成均匀的悬液，参与反应时类似液相，反应速度大大加快；
“链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共价相互作用的一对化合物，具有牢固而特异的结合，应用此放大系统，使检测的灵敏度大大提高；
利用氧化铁的磁性，使用电磁场分离结合态和游离态，方便迅速，实现了精确的全自动化；
标记物的再循环利用，使发光时间更长、强度更高、易于测定。

ELIA优越性
高度敏感，可达pg／ml或pmol水平；
特异性强，重复性好，CV＜5％。
测定范围宽，可达7个数量级。
试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长，达数月甚至数年。
操作简单，耗时短，易于自动化。
在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。

临床应用
激素
肿瘤标记物
内分泌功能
传染性疾病
其它：如VB12、叶酸、铁蛋白、肌钙蛋白、肌红蛋白、酶、脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。