当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下。

（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。

（2）边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中，逐渐加入，lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中，大约需5~10min。

（3）继续搅拌10min,然后加入5%BSA使其终浓度为1%,或加入3%聚乙二醇（PEG，Mr：20000）使其终浓度为0.05%,其效果BSA要优于PEG。

（4）将标记好的胶体金装入透析袋中，两头扎紧，放人蔗糖或硅胶中浓缩，浓缩到原体积的1/10量，浓缩完毕后纯化。如用离心纯化方法时，不需要浓缩。