溶液准备：

PBS（pH7.4）：10mM Na₂HPO₄ ，1.8mM KH₂PO₄，50mM NaCl，2.7mM KCl

实验步骤：

1 . 用盖玻片将12孔板盖上，细胞培养至50%浓度。

2 . 将培养液倒掉并用PBS清洗两次。

3 . 在室温下，将细胞用溶解于0.1% Triton×100-PBS中的4%福尔马林固定20min.

4 . 用2ml 1%BSA-4%羊血清-PBS封闭1h（注意：任何抗体或者抗血清，使用前应10000g离心5min,以除去小颗粒）。

5 . 用2ml PBS洗涤两次，每次5min.

6 . 室温下，在40ml 1%BSA-PBS中，加入一抗反应45min.

7 . 用2ml PBS洗涤两次，每次5min.

8 . 室温下，在40ml 1%BSA-PBS中加入偶联好的二抗反应30min.

9 . 用2ml PBS洗涤两次，每次5min.

10. 用防褪色试剂制作标本。

固定准备：

溶解在PBS中4%的福尔马林：每25ml中加入1-2滴10M NaOH对福尔马林进行解聚，然后加热到65℃就可   以得到清晰的溶液，在把它放到冰上测pH值。