1、流式细胞仪(Flow Cytometer):是集光电子物理,光电测量,计算机,细胞荧光化学,单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。
2、流式细胞术(Flow Cytometry):利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速(每秒可达1000-10000个)的定量分析和分选(纯度可达99%以上)的技术。
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)
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流式细胞仪结构
• 激光光源及光束形成系统
• 流动室及液流驱动系统
• 光学系统:透镜、滤光片、小孔,聚焦光源,
收集不同波长的荧光信号。
• 信号检测与分析:光电倍增管(PMT)、补偿
电路。荧光信号转换为电信号,并将信号放大。
• 存储、显示、分析系统:计算机。
• 细胞分选系统
流式免疫分型技术要点
标本的获取和运输
标本的制备和染色
仪器的校准和质控
流式细胞仪数据获取与储存
FCM的主要测定指标
FSC, SSC, FL1, FL2, FL3 (FL4)
其中:FSC:反映细胞的大小;SSC:反映细胞内颗粒性
FCM标记方法
单标:一种单抗/tube: FL1, FSC, SSC(三参数)
双标:(两种单抗/tube):FL1, FL1, FSC, SSC(四参数)
三/四标:(三种单抗/tube)(四种单抗/tube):
FL1-FL3/4, FSC, SSC
荧光素种类
FITC(异硫氰酸荧光素):绿色 530nm
PE(藻红蛋白):橙黄色 575nm
PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白):深红色 675nm
PI(碘化丙啶):橙红色 620nm
488nm波长的氩离子激光激发
APC(别藻兰蛋白):红色 660nm
630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发
抗体的选择
PE最强,适用于弱表达抗原
FITC最便宜,适用于强表达抗原,适用范围广
biotin-avidin不适合 弱抗原的检测
数据显示方式
单参数直方图
双参数二维点图
等高图
二维密度图
三维图
流式细胞的主要信息:Fluorescence
FL1
FL2
FL3
FL4
流式常见图形 (Histogram Plot)
流式常见图形 (Dot Plot)
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