前列腺特异性抗原（PSA）是一种由前列腺上皮细胞分泌的，分子量约为 30-33 KDa 的单链糖蛋白分子，是近年来广泛应用于临床筛查前列腺癌（PCa）的特异性肿瘤标志物，同时分析血清 PSA 和游离 PSA（FPSA）水平，并以 FPSA 百分比为指标可以显著区分“诊断灰区”里的良性前列腺疾病（BPH）和PCa。

我们建立了一种增强化学发光酶免疫分析的方法， 并应用于血清中前列腺癌肿瘤标记物PSA 和FPSA 的定量分析。我们用鲁米诺（Luminol）作为化学发光体系的底物，对碘苯酚作为发光增强剂。我们采用双抗体夹心的免疫体系来实现对待测抗原的精确定量分析，首先将一株单克隆抗体利用物理吸附包被在聚苯乙烯材质的 96 孔微孔板上，将样品或者标准品和另一株标记有辣根过氧化物酶（HRP）的酶标记抗体溶液依次加入微孔板各孔，在室温条件下，静置温育 45 min，达到免疫反应平衡，形成固相抗体-抗原-酶标记抗体的免疫复合物，然后利用洗涤的方式将没有结合的酶标记抗体去除，实现免疫复合物上的 HRP 和游离 HRP标记抗体的分离，最后向免疫反应体系中加入化学发光底物，通过测定酶促化学发光的相对发光强度（RLU），结合标准曲线，实现对待测抗原的定量分析。

该方法用于 PSA 和 FPSA 的定量分析，灵敏度分别为 0.01 ng/ml 和 0.02 ng/ml，标准曲线线性范围分别为 5-100 ng/ml 和 0.5-10 ng/ml，相关系数都大于 0.99，分析内、分析间变异分别为 2.7-7.3 %和 3.1-8.8 %，方法学回收率也都在 90–110 %之间，和人血清中常见的 6 种肿瘤标志物 AFP、CEA、CA50、CA125、CA15-3、CA242 几乎没有交叉反应，37℃加速实验 3 天、7 天、10 天，4℃ 1 个月、3 个月、6 个月、9 个月、12 个月稳定性考查结果表明该方法有很好的稳定性。

该方法特异性好，灵敏度、测量范围和稳定性均优于传统的放射免疫分析方法（RIA）和酶免疫分析方法（EIA），操作简便，免疫分析全过程都在室温条件下进行，只需要 45 分钟，大大提高了临床适用性。

参考文献

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