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免疫金银法(IGSS)操作指南

标签: 免疫金银法 操作指南

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一、基本原理

免胶体金检测技术是用金属离子和金属蛋白复合物应用免疫组化原理检测组织内抗原抗体的技术,常用胶体金(铁、汞等)重金属离子。由于胶体金容易制成各种大小的颗粒且有很高的电子密度及分辨率,又不影响抗体的活性,因此既可用于免疫组化又适于免疫电镜技术。

二、操作步骤

1、脱蜡至0.05mol/L TBS PH7.4缓冲液。

2、抗原修复。

3、1%卵蛋白(EA)15min,不洗。

4、特异性免疫抗体 37oC 120min或4oC 20h。

5、0.05M TBS洗后改0.02M TBS(0.1%BAS)洗10min。

6、1%卵蛋白(EA)15min,不洗。

7、PAG(1:15)室温孵育60min。

8、1%戊二醛10 min;双蒸水洗5min。

9、1%明胶洗5min;银避光显影8-15min;双蒸水洗15min。

10、用固定液(15%硫酸钠、20%硫代硫酸钠混合液)固定5min。

11、 1%戊二醛固定5min;温水洗,

12、核固红或甲基绿衬染,常规脱水封片。

三、实验结果判断

阳性物质呈黑色或黑褐色颗粒。

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