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DAKO EPOS免疫组化一步染色法

标签: 免疫组化 染色法

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自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来,这门技术得到了迅速的发展。DAKO EPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法,是一种即用型快速而有效的方法,具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。

1.、材料和方法

(1)材料

均为本院日常活检组织共32例,其中肉瘤5例,淋巴瘤7例,上皮癌12例,胶质瘤8例。用10%甲醛固定,常规脱水、包埋、切片。

(2 )试剂

EPOS-Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100和一抗Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100以及LSABKit(K681)均由DAKO公司生产,广州基因公司提供。

(3 )方法

LSAB法(略)。

DAKOEPOS法:切片常规脱蜡至水;3%过氧化氢室温孵育5min;PBS缓冲液洗3次,每次5min;用DAKO EPOS/Horseradish Peroxidase(HRP)室温孵育30~60min;PBS缓冲液洗3次,每次5min;DAB显色,水洗;苏木素复染、脱水、封片。

2、结果

DAKO EPOS一步法染色结果阳性物质呈棕黄色,LCA定位于细胞膜,Vimentin、Cytokeratin、及S?100定位于细胞浆,苏木素复染细胞核呈蓝色,背景清晰,非特异性染色少,EPOS法与LSAB法比较,不但简化了操作步骤,而且大大缩短了染色时间,具有更佳的对比度,结果比较如表1所示。

3、讨论

DAKO EPOS一步染色法是将特异性抗体和酶标分子结合于柔韧的多聚螯合物,使特异性抗体和检测系统结合为一种试剂,具有高灵敏性、高特异性、省时、减少处理步骤、重复性好、即用、低背景染色的优点。

(1)省时

传统的PAP、ABC或LSAB法整个染色程序时间在2~3h之间,而DAKOEPOS一步法染色时间只需40min,大大地节约了时间,而且省去了很多繁琐的步骤。值得一提的是,利用DAKOEPOS一步法加上微波快速处理,整个染色制片过程仅用10min即可,特别适合于冰冻切片急诊手术的鉴别诊断,只需Cytokeratin、LCA、S-100、Vimentin几种抗体,就可以区分该肿瘤是来源于上皮、淋巴、神经或间叶组织的肿瘤,为手术的进一步进行和及时用药治疗提供了更为可靠的依据。

(2 )低背景

从表1中可以发现,DAKO EPOS法染色的背景比LSAB法要低,其原因是前者只要一步即可,HRP直接结合在特异性的抗体上,无需引入桥抗,后者则需要三步,必需借助桥抗的连接且HRP是结合在非特异性的复合物上,染色步骤增多,导致背景染色加深。

(3 )高敏感性和高特异性

不同种系的IgG分子结构是相似的,因此抗一种动物的IgG可能与另一种动物的IgG会引起交叉反应。而DAKO EPOS法将一抗和检测系统结合为一种试剂,避免了动物间IgG的交叉反应,从而提高了敏感性和特异性。

此外,DAKO EPOS试剂是即用型产品,无需进行稀释,且以使用方便的滴瓶提供,减少了抗体的污染,更适合在实际操作中的应用。

 

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