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一步一步教你读流式图:sub-G1凋亡图

标签: 流式图 sub-G1凋亡图 教程

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凋亡都比较多,但遗憾的是与G1峰分得不是很开,因此,Modfit分析的时候,会根据结果用统计学原理将它们分为Apo和G1,但这样可能掩盖真正的结果!

建议做PI染色的时候,在PBS洗两次后,加入PC buffer,这是一种轻破膜剂,可以使断裂成小片断的DNA出细胞而降低其在FL2-Ad上的值,这样就容易区分G1和APO了。

凋亡诱导,左边为对照,右边为凋亡组

 

 

对照很好,cv值不错,凋亡率控制得也不错!凋亡非常明显,而且峰也很漂亮。

唯一的美中不足就是凋亡峰的位移稍低,如能用PC buffer 轻破膜,效果将更漂亮!请查阅cnki中关于Sub-G1法测凋亡的关于PC buffer的使用方法(作者:龚建平 关键字:Sub-G1查),将对实验有很大帮助!

细胞周期分析,modifit ,不知凋亡细胞为什么没和G1期分开?右图为对照,左图实验组

作者用的是muticycle,所以不太能确定。但是不管是哪家的软件,都是按一定的数学模型(公式)结合数据进行模拟,所以在数据分布不够典型的时候是会产生很大误差的。就像你的结果,我根据经验判断是modfit强行进行subG1计算,其实算进去的基本上都不是凋亡细胞,但是它没有模糊概念,生硬地套用了subG1的模拟方程,所以才有“subG1”的出现。如果你对sample只进行one cycle模拟,结果会不一样的。建议,除非subG1和G1分隔干净利落,否则不要随便应用cycle软件进行模拟,否则大部分结果是错误的,cycle软件本质上说适合作周期分析,作AP分析有较为严格的限制。直接拉水平门就可以了。

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