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协同凝集实验

标签: 协同 凝集实验

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金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白能与人及多种哺乳动物(猪、兔、羊、鼠等)血清中IgG类抗体的Fc段结合。IgG的Fc段与SpA结合后,两个Fab段暴露在葡萄球体表面,仍保持其抗体活性和特异性当其与特异性抗原相遇时,也出现特异凝集现象。在本凝集反应中,金黄色葡萄球菌菌体成了IgG抗体的载体,称为协同凝集反应。本反应也可用于检测微量抗原。

一、材料

1、抗原:可溶性伤寒杆菌“O”抗原;

2、免疫血清:伤寒杆菌0901免疫兔血清;

3、10%CoWan1株金黄色葡萄球菌(含大量蛋白A)的菌液;

4、0.5%甲醛,用PBS配制;

5、吸管、滴管、玻片等。 

二、方法

1、10%葡萄球菌菌悬液的制备

CoWan1株葡萄球菌接种于柯氏瓶,37℃培养18-24小时,用PBS洗下菌苔,每分钟2500转速度离心20分钟。沉淀菌用PBS洗两次后,用0.5%甲醛(用PBS配置)在室温中固定3小时。置于80℃水浴中4分钟以破坏菌体的自源性分解酶。再用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液;

2、致敏葡萄球菌

1毫升10%的菌悬液加0.1毫升伤寒O抗血清充分混合放入37℃水浴中30分钟(中间需摇动两次)。取出后经每分钟2500转速度离心20分钟,弃去上清液,沉淀菌用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液;

3、协同凝集实验

取伤寒“O”可溶性抗原一滴致敏葡萄球菌悬液,一滴在载波片上混匀,观察约2分钟。一般在几秒钟内即可发生凝集;

滴一滴致敏葡萄球菌悬液于玻片上,用接种环取伤寒O菌培养物少许置于悬液中使成均匀孔状,观察约2分钟,记录有无凝集;

用伤寒“O”杆菌培养物与未致敏的葡萄球菌菌液或用痢疾杆菌培养物与致敏的葡萄球菌菌液作玻片凝集,均为阴性反应,不出现凝集。

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