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间接炭凝反应原理及方法

标签: 间接炭凝 原理 方法

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一、原理

间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体,将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上,形成炭粉抗体复合物,当炭血清与相应的抗原相遇时,二者发生特异性结合,形成肉眼可见的炭微粒凝集块。

目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。

二、材料与试剂

1、炭粉 

炭粉粒子最好大小在0.12mm~0.15mm,目前市场上出售的炭粉均不合要求,必须过300目/寸的标准筛以300r/min离心去沉淀,再以3 000r/min离心去上清,收集沉淀物;

2、高免血清;

3、待测标本;

4、灭活兔血清;

5、正常血清;

6.标准抗原;

7、0.05mol/L pH7.2PBS液;

8、1%硼酸的PBS液。

三、操作方法

1、炭致敏 

取湿炭粉0.25g(干粉0.10g),加入经56℃~60℃灭活30min的稀释高免血清3ml,充分摇匀,置37℃致敏30min,不时摇动,取出后用pH 7.2 PBS液洗涤3次。最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗涤一次,离心去上清,再取此液3ml,混匀即可。同时以正常血清致敏的炭粒处理,以作对照。

致敏血清(加1/万硫柳汞防腐)于室温或4℃冰箱中保存,一年内有效。

2、取洁净玻璃板一块,以玻璃铅笔划成小格,加被检标本0.10ml,再加免疫炭血清0.05ml,充分混匀,静止1min~5min,判定结果。

同时设三个对照:

(1)免疫炭血清+标准抗原;

(2)正常炭血清+标准抗原;

(3)正常炭血清加待检抗原。

四、结果判定

在对照完全成立的情况下,判定本试验结果:

“++++”:炭粉全部凝集,液体完全清亮透明;

“+++”:炭粉大部分凝集,液体透明;

“++”:炭粉一半凝集,液体较透明;

“+”:炭粉微凝集,但与对照有差别,液体混浊;

“—”:炭粉不凝集,液体不透明;

炭凝以“++”做为反应滴度的终点。

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