一、原理 间接炭凝集反应简称炭凝。它是以炭粉微粒作为载体,将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上,形成炭粉抗体复合物,当炭血清与相应的抗原相遇时,二者发生特异性结合,形成肉眼可见的炭微粒凝集块。 目前炭凝反应已用于炭疽、鼠疫和马副伤寒性流产等病的诊断。 二、材料与试剂 1、炭粉 炭粉粒子最好大小在0.12mm~0.15mm,目前市场上出售的炭粉均不合要求,必须过300目/寸的标准筛以300r/min离心去沉淀,再以3 000r/min离心去上清,收集沉淀物; 2、高免血清; 3、待测标本; 4、灭活兔血清; 5、正常血清; 6.标准抗原; 7、0.05mol/L pH7.2PBS液; 8、1%硼酸的PBS液。 三、操作方法 1、炭致敏 取湿炭粉0.25g(干粉0.10g),加入经56℃~60℃灭活30min的稀释高免血清3ml,充分摇匀,置37℃致敏30min,不时摇动,取出后用pH 7.2 PBS液洗涤3次。最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗涤一次,离心去上清,再取此液3ml,混匀即可。同时以正常血清致敏的炭粒处理,以作对照。 致敏血清(加1/万硫柳汞防腐)于室温或4℃冰箱中保存,一年内有效。 2、取洁净玻璃板一块,以玻璃铅笔划成小格,加被检标本0.10ml,再加免疫炭血清0.05ml,充分混匀,静止1min~5min,判定结果。 同时设三个对照: (1)免疫炭血清+标准抗原; (2)正常炭血清+标准抗原; (3)正常炭血清加待检抗原。 四、结果判定 在对照完全成立的情况下,判定本试验结果: “++++”:炭粉全部凝集,液体完全清亮透明; “+++”:炭粉大部分凝集,液体透明; “++”:炭粉一半凝集,液体较透明; “+”:炭粉微凝集,但与对照有差别,液体混浊; “—”:炭粉不凝集,液体不透明; 炭凝以“++”做为反应滴度的终点。 |
→如果您认为本词条还有待完善,请 编辑词条
上一篇Immunoprecipitation?of?Proteins 下一篇 时间分辨荧光免疫法定量检测AFP试剂盒临床应用研究
词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
0