一、溶血反应 免疫血清与其相应的抗原细胞(血球、细菌及其组织细胞)相遇,并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶血反应、溶菌反应等。 溶菌反应只在某些细菌中出现(如霍乱弧菌)。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原(红血球)和抗体(溶血素)进行特异性的结合,并吸着了补体,而使红血球在补体的作用下被溶解,于是产生了溶血现象。 1、材料 (1)抗原:2%绵羊红血球; (2)抗体:溶血素; (3)补体:取健康豚鼠血清作为补体; (4)小试管、生理盐水、水浴箱。 2、方法 (1)取小试管3只,按下表加入各物(容量单位为毫升); (2)将上述3试管放在37℃水浴箱内15—30分钟观察有无凝血现象。
二、补体结合反应 当抗原与其对应的抗体结合时,所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液,故补体结合现象不能被肉眼看出来,因此必须借助溶血系统(溶血素及相对应的羊血球)作为指示剂,来判定媒质中有无游离的补体,近而推定媒质中未知抗原(或抗体)和已知抗体(或抗原)是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性,因之常应用于传染病的诊断,特别诊断病毒疾病和梅毒。 由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系,因此在作本试验之前,必须通过一系列的预备实验来确定各成分的使用量,故本反应的实验方法较为复杂。 本次实验以伤寒杆菌免疫血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。 1、材料: (1)抗原:伤寒的抽出液; (2)抗体:伤寒杆菌的免疫血清; (3)补体:豚鼠血清; (4)溶血素:抗绵羊血细胞的兔血清; (5)2%绵羊红血球; (6)小试管、试管架、水浴锅。 3、方法: 预备试验(示教说明) 预备试验包括溶血素效价的滴定,补体效价的滴定,抗原效价的滴定及被检血清的处理。 (1)溶血素效价的滴定 按照下表加入各物
凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管(即1:4000倍稀释)0.5毫升溶血素为一个单位,在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液,所以试验时应取1:2000倍稀释的溶液。 |
(2)补体单位滴定 依下表加入各试剂:
摇 匀 后 置 37 ℃ 水 浴 45 分 钟 匀 后 置 37 ℃ 水 浴 15 分 钟 能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位,上表中第3管(即0.3毫升),但因补体的部分损失,故普通稍高的一管为实用单位,实际试验时用两个实用单位。 上表结果为:补体标准单位:0.3毫升;补体实用单位:0.35毫升;补体两个实用单位:0.70毫升。因试验时时两个实用单位的补体0.5毫升,可依下列比例关系换算:20:0.7=x:0.5,得x=14.3,即需将补体稀释14.3倍,用0.5毫升则含有两个实用单位。 (3)抗原的滴定 在用已知抗原测定未知抗体时,必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适浓度(反之用已知抗体测定未知抗原时,则需滴定抗体效价)
如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌,混有淋巴液或显著溶血时,常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁,也可出现抗补体。若有抗补体发生,应抽血重试验。 |
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