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免疫组化Elivison二步法操作流程

标签: 免疫组化 Elivison二步法 操作流程

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1、石蜡切片置于60℃烘箱中,烘片2h,脱蜡至水,用pH7.4的PBS冲洗三次,每次3min(3×3')。

2、取一定量PH6.0柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10min,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3'。(注:不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定)

3、每张切片加1滴3% H2O2,室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3×3'。

4、除去PBS液,每张切片加1滴相应的第一抗体(相应稀释倍数),室温下孵育2小时。

5、PBS冲洗3×5'。除去PBS液,每张切片加1滴聚合物增强剂(试剂A),室温下孵育20分钟。PBS冲洗3×3'。

6、除去PBS液,每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物(试剂B),室温下孵育30min。PBS冲洗3×5'。

7、除去PBS液,每张切片加1滴新鲜配制的DAB液,显微镜下观察5min。

8、苏木素复染,0.1%HCl分化,自来水冲洗,蓝化。

9、切片经梯度酒精脱水干燥(由低浓度到高浓度),二甲苯透明,中性树胶封固,晾干后观察。

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