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标签: 免疫组化 ABC法 操作流程

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1、4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)过夜,蜡块制作,切片,贴片。0.01M PBS清洗5min×3次;

2、脱蜡、水化:用二甲苯两次10min,用梯度乙醇由低浓度到高浓度进行水化;

3、加入0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80ml+0.01M PBS 100ml+30%过氧化氢)30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,0.01M PBS清洗5min×3次;

4、加入0.3% Triton X-100(0.3ml Triton X-100+0.01 M PBS 100ml)30min,以增加细胞的通透性,0.01M PBS清洗5min×3次;

5、加入用血清稀释液(牛血清白蛋白1.00g+0.01M PBS 100ml+叠氮纳0.08g)稀释的一抗,4℃存放24-48h。吸去抗体,0.01M PBS洗5min×3次;

6、加入0.01M PBS稀释的的二抗,室温孵育2h。0.01M PBS洗5min×3次;

7、加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,0.01M PBS洗5min×3次;蒸馏水迅速冲三次;

8、加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般3~10min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01M PBS终止反应;

9、苏木素复染;

10、梯度酒精脱水之后,透明,封片,拍照。

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