本试验采取热法血清稀释法。每滴相当于0.02ml，总量为6滴，相当于0.12ml。

一、材料

1、抗原 系各型菌株培养物多价抗原，按瓶签说明倍数稀释；

2、溶血素 正式试验时使用2个工作单位；

3、补体系冻干补体 用灭菌生理盐水作1:5基础稀释。在溶血素效价测定和补体效价滴定时均作1:60稀释，在正式试验时，用2个工作单位；

4、1％的红血球悬液 用灭菌生理盐水洗涤与配制。在使用时与等量含2个工作单位的溶血素液配成致敏红血球悬液；

5、阳性血清 正式试验时1:100稀释；

6、阴性血清 正式试验时1:10稀释；

7、生理盐水。

二、预实验

1、溶血素效价测定 用小试管做时，单位为ml；用血清稀释板做时，单位为滴。

（1）溶血素稀释

先将溶血素做1:1000基础稀释。见表1。

（2）溶血素效价测定

见表2。

根据上述结果,溶血素效价为1:5000即为一个工作单位，2个工作单位溶血素为1:2500稀释度。

2、补体效价测定

（1）补体稀释

见表3。

（2）补体效价测定

见表4。

以2个单位补体稀释度计算。按上表所示，在两列中达到完全溶血（＃）时，最小补体量1:60稀释为0.12ml，（即为第四管与第八管）做为1个补体单位。在抗原效价测定和正式试验时，使用补体0.20ml中应含2个单位补体。所以补体的稀释度应为：60:（0.12×2）＝x:0.20,x=50,即取1ml补体原液加49ml生理盐水即成。

3、抗原效价测定 新生产的抗原可按瓶签说明效价用，贮藏过久的抗原，应作效价测定后使用。

（1）抗原稀释

用血清稀释板做，见表5。

（2）抗原效价测定

见表6。

（3）抗原效价测定（例）

见表7。

以抗原的最高稀释度与最高稀释度的阳性血清呈完全抑制溶血者，作为抗原效价。

按表7，抗原效价为1:32，即在使用时将抗原以生理盐水作1:32倍稀释。阴性血清对照应完全溶血。抗原抗补体对照应不超过1:2稀释度，为合格。

三、本实验

见表8。

四、注意事项

1、结果判定时，完全透明为100％溶血（＃），混浊为50％溶血（++）时，判定以后者标准为依据。

2、抗原效价低于1:4时，不可使用。阳性血清效价低于1:100（抑制溶血程度＃）者，不能用于抗原效价测定。但若抑制程度在++以上者，尚可供正式试验时阳性血清对照用。

3、V型血清板较U型血清板反应观察清晰。

4、由于血清板传热性能较差，所以感作时间应适当延长。一般以阴性血清对照孔完全溶血为止。