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反向间接乳胶凝集反应原理及方法

标签: 反向 间接 乳胶凝集反应 原理 方法

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一、原理

同炭凝,只是载体换为聚苯乙烯乳胶,它是一种由0.6μm~0.7μm的颗粒所组成的胶体溶液,具有良好的吸附蛋白质的性能。

间接乳胶凝集目前已用于鼠疫菌、沙门氏菌、流感杆菌、脑膜炎双球菌、葡萄球菌肠毒素等的诊断。

二、材料与试剂

1、聚苯乙烯乳胶

2、免疫血清

3、正常血清

4、标准抗原

5、待检抗原

6、0.02Mol/L pH8.2硼酸缓冲液

硼砂                 6.67g

硼酸                 8.04g

H2O          加至  1 000ml

7、生理盐水

三、操作方法

1、乳胶液制备  取聚苯乙烯乳胶0.10ml,加灭菌蒸馏水0.40ml,再加pH8.2硼酸缓冲液2ml,混合后即为25倍稀释的乳胶液。

2、乳胶致敏  在上述乳胶液中滴加稀释的免疫血清0.20ml~0.70ml,边加边摇,当出现肉眼可见的颗粒后,仍继续加血清,直至颗粒消失,成为均匀的乳胶悬液为止。镜下检查应无自凝。使用时,应与一定稀释度的相应抗原出现阳性反应,与生理盐水出现阴性反应为合格。加防腐剂后,于冰箱内保存。注意防止冰冻。

同时以正常血清代替免疫血清进行乳胶致敏,以作对照。

3、取洁净玻板一块,用玻璃铅笔划成小格,滴加待检样品0.10ml,再滴加高免血清致敏乳胶0.01ml,以牙签或火柴杆混匀,在3min内判定结果。

四、结果判定

“++++”:全部乳胶凝集,成絮状团块,液体清亮。

“+++”:大部分乳胶凝集成较小的颗粒,液体清亮。

“++”:半量乳胶凝集成细小颗粒,液体混浊。

“+”:较少量的乳胶凝集成可见的细颗粒,液体混浊。

“-”:全部乳胶仍为均匀液体,无颗粒。

以“++”作为该反应滴度的终点。

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