- 生命经纬知识库

标签: MACS 磁珠细胞分选

顶[4] 发表评论(132) 编辑词条

stem cell公司MACS产品主要技术有以下几类：

一、EasySep® 磁性正选或负选细胞，不需柱子；

二、StemSep® 磁性正负分选，需要柱子；

三、RosetteSep® 免疫梯度离心分选，不需磁极，不需柱子；

四、SpinSep®负选产品。

以下一一介绍。

一、EasySep®磁性正选或负选细胞，不需柱子

用于正、负选人或其它种类动物的细胞

EasySep® 是一种新型而高效的免疫磁珠细胞分选技术，具有单克隆抗体的特异性和无分离柱磁性系统的简便性。靶细胞表面特异性的抗原抗体反应为富集细胞提供了理论基础，而StemCell公司专利的四聚体复合物(TAC) 技术则为高纯度靶细胞的富集提供了保障。需要富集的靶细胞通过四聚体复合物与磁微粒相联结合，在EasySep® 专用磁极提供的磁场中，使靶细胞与非靶细胞分离。此方法即可用于正选，也可用于负选。

EasySep®系统的优势

为什么选用EasySep®？
1、经济，应用正选抗体
2、不需要柱子
3、高纯度
4、操作简单快速
4、FACS兼容，磁珠很小不影响流式分析
5、采用直接标记法分选人的细胞，采用间接标记法分选其它种类动物细胞

独特的EasySep® 磁极内腔可产生高强度的磁场，足以分离磁微粒标记的细胞，无需分离柱提供提供更高强度的磁场。由于磁微粒极小，不会影响靶细胞的流式分析结果，因此不需要去除。除了现有的定型产品外，客户可选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合，来富集任何所需的细胞。如果您有自己的小鼠IgG1抗任何细胞的抗体, 也可以使用“Do-It-Yourself”试剂盒做成TAC，用来分选您想要的细胞。此外，还可以根据您的特殊需要，专门为您设计定做试剂盒。

用于正选小鼠的细胞标记方式

小鼠的细胞正选是采用间接标记的方式。先将小鼠的细胞与PE标记的抗靶细胞的特异性抗体结合，再采用StemCell公司的专利TAC技术将PE标记的细胞与EasySep®免疫磁珠相连（见右图）。在EasySep®专用磁极提供的磁场中，即可使靶细胞与非靶细胞分离。

您可以使用我们提供的完整的试剂盒分选小鼠的细胞，也可以选择EasySep® PE、FITC或生物素分选系统与自己的PE、FITC或生物素—偶联的单抗相结合，来富集任何所需的细胞。

用于负选小鼠的细胞标记方式

EasySep®小鼠的细胞负选也是采用间接标记的方式。先将不需要的小鼠细胞与生物素标记的抗靶细胞的特异性抗体结合，再采用StemCell公司的专利TAC技术将生物素标记的细胞与EasySep®免疫磁珠相连（见右图）。在EasySep®专用磁极提供的磁场中，即可将不需要的细胞去除。

StemSep®

磁性正负分选，需要柱子

StemSep® 正选试剂为需要柱子的免疫磁珠正选方法设计

使用四聚体复合物（TAC）可将需要的细胞与磁珠相连。TAC由两个小鼠的IgG1抗体和两个大鼠抗小鼠的IgG1组成。两个大鼠抗小鼠的IgG1将两个小鼠抗体联起来，其中一个小鼠抗体与需要的细胞特异结合，而另一个小鼠抗体与磁珠上包被的葡聚糖结合。当需要的细胞与磁珠结合后，在通过放在磁极上的柱子时，需要的细胞被留在柱子上，不需要的细胞会通过柱子。将留在柱子上的细胞收集起来即可进行后续的研究。

为什么选用StemSep® 正选？

１、经济，应用正选抗体

２、高纯度

３、FACS兼容，磁珠很小不影响流式分析

４、试剂可以在其它需要过柱子的免疫磁珠分选系统上应用

操作步骤

StemSep® 负选试剂为需要柱子的免疫磁珠负选方法设计

使用四聚体复合物（TAC）可将不需要的细胞与磁珠相连。TAC由两个小鼠的IgG1抗体和两个大鼠抗小鼠的IgG1组成。两个大鼠抗小鼠的IgG1将两个小鼠抗体联起来，其中一个小鼠抗体与需要的细胞特异结合，而另一个小鼠抗体与磁珠上包被的葡聚糖结合。当不需要的细胞与磁珠结合后，在通过放在磁极上的柱子时，不需要的细胞被留在了柱子上，需要的细胞会通过柱子。

为什么选用StemSep® 负选？

1、灵活，应用于各种样品和各种组织

2、较高纯度

3、高效能去除掉 3 log（99.9%）的不需要的细胞

4、负选，细胞没被标记。

5、试剂可以在其它需要过柱子的免疫磁珠分选系统上应用。

订货须知：

1、StemSep®负选抗体和磁珠

2、负选专用柱子

3、StemSep®磁极或0.5特斯拉的磁极

每个产品号下的产品包括StemSep® 正选抗体和磁珠, 每毫升抗体可标记109个单个核细胞，但CD34+ 分选每毫升可标记2X109个细胞。

RosetteSep®

免疫梯度离心分选，不需磁极，不需柱子

RosetteSep® 细胞负选产品

RosetteSep® 是一种快捷而简便的方法，可以从全血中直接富集高纯度靶细胞。利用StemCell公司专利的四聚体复合物(TAC)，将简单的密度梯度离心技术引入以特异性抗体为媒介的细胞富集系统。RosetteSep® 分离细胞的过程，仅仅包括室温下样品与单抗混合物的相互作用，以及标准的密度梯度离心。RosetteSep® 单抗混合物使非靶细胞与全血中的多个红细胞交联，形成免疫玫瑰花结。这增加了非靶细胞的密度，当进行密度梯度(Ficol—Paque或RosetteSep® DM—L)离心时，非靶细胞会随着红细胞聚集沉淀，未被抗体标记的靶细胞即可被收集。此分离不需要任何其他特殊仪器设备，收集的靶细胞可直接用于以后的研究。

特点：

1、快捷——比普通的白细胞分离只增加20分钟；

2、简单——直接从全血中一步离心获得；

3、回收率高——没有白细胞分离后各种处理带来的细胞丢失；

4、安全——在收集管内即可进行标记，可以减少样品处理的步骤；

5、负选——收集的细胞未被抗体标记，可用于各种研究；

6、经济——不需要任何特殊的仪器设备；

7、灵活——可用于富集或去除任何特殊的细胞群，并可随时进行实验。还可按您的需求特殊定做　

订货须知：

1、2ml抗体可以标记40ml全血，10ml抗体可以标200ml全血

2、在购买抗体的同时还需要另外购买淋巴细胞分离液。RosetteSep® DM-L 也是一种淋巴细胞分离液，密度为1.081，与T细胞和B细胞的抗体配合使用可以提高回收率。

3、HetaSepTM可用来去除样品中多余的红细胞。

4、可订制的抗体包括：CD2，CD3，CD4，CD5，CD8，CD10，CD11b，CD14，CD16，CD19，CD20，CD24，CD25，CD27，CD29，CD33，CD34，CD36，CD38，CD41，CD45，CD45RA，CD56，CD66b，CD66e，CD69，CD124，HLA－DR， IgE， breast carcinoma, TCRαβ, TCRγδ

RosetteSep® 回收率：

无FicollTM 离心后分选步骤对细胞的进一步丢失。

使用FicollTM 离心法去除血液标本中的红细胞和粒细胞是分离单个核细胞的常规步骤。离心后可在血浆和FicollTM 之间层取到单个核细胞。RosetteSep® 利用了这一简单的操作，仅在离心之前增加了抗体孵育，使不需要的细胞与红细胞结合，在FicollTM 离心后，不需要的细胞随红细胞一起被去除掉。这样就得到了您需要的细胞。与免疫磁珠法不同，此方法不需要后续对细胞的再处理，得到的细胞不论是回收率还是细胞活力都很高。

RosetteSep® 新的使用方法：

RosetteSep® 与BD Vacutainer® CPT管同时使用

BD Vacutainer® CPTTM管是一种真空采血管，管内含有抗凝剂、密度梯度离心液和胶。RosetteSep®富集细胞的过程直接在CPTTM 管内完成。CPTTM管中的胶在离心前后都可以将样品和密度梯度离心液分开（见右图）。

将适量的RosetteSep®抗体加入采好血的CPTTM 管中室温孵育20分钟，使不需要的细胞通过抗体与红细胞结合，之后离心25分钟，富集的细胞就是您需要的细胞，只要将这些细胞倒出或用加样枪吸出即可。

CPTTM 管有两种抗凝剂可以选择，右表是分别使用两种抗凝剂CPTTM 管分选的效果。

SpinSep®

免疫密度离心分选，不需磁极，不需柱子

SpinSep® 细胞负选产品

SpinSep® 是一种新型而简便的富集高纯度细胞的方法。细胞分离过程中不需要磁极、分离柱和任何其他设备。正如RosetteSep® 直接从全血中富集所需细胞一样，SpinSep® 也是将单克隆抗体的特异性与密度梯度离心的简便性相结合。两者的基本原理相似，但两者处理的样品来源不同，SpinSep®是直接从小鼠的脾脏、骨髓的细胞悬液中富集所需细胞或者直接从新鲜或冷冻的全血单个核细胞中富集细胞。 SpinSep® 富集细胞不需要借助红细胞。针对非靶细胞的单抗混合物直接加入到细胞悬液中，再加入特殊设计的密度粒子，这些粒子选择性地与单抗标记的非靶细胞结合，从而增加了这些细胞的密度；通过使用特殊配制的SpinSep® 密度梯度液离心，分离获得所需的靶细胞。由于是负分选，因此，收集的靶细胞未被任何单抗标记过。

为什么选用SpinSep® ？