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标签: 透射比浊法 血清C3 含量测定

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1、原理 血样本中C3与抗C3血清在液相中反应,比例合适时形成可溶性免疫复合物。聚乙二醇(PEG6 000)可沉淀其免疫复合物,使溶液的透光率(T)下降。免疫复合物的量与C3和抗C3量呈函数关系,当固定抗C3浓度时,免疫复合物的形成量主要取决于样本中C3的含量,并与其呈正相关。故通过检测溶液吸光度值即可判定样本中C3含量。

2、主要试剂

(1)抗C3血清 有试剂出售,一般按说明书的效价使用,也可预先用方阵法滴定其效价。试验时按最适工作浓度稀释。

(2)稀释液 PEG6000 10.00g,NaF 10.00g,Na2HP04·12H20 101.50g,NaH2P04·2H2010.00g,NaN31.0g,加蒸馏水溶解至1000mL。用C3玻璃滤器过滤,室温保存。

3、操作步骤 将抗C3血清按所示效价稀释,加到聚苯乙烯反应板孔中,156ml/孔,然后每孔加入不同稀释度的待测血清4ul,于微型混合器上振荡混匀hnin,置37℃水浴30min后,取出混匀,用酶标仪测定其490nm吸光度。用抗C3血清溶液160tzL作空白调零。根据标准曲线即可得知样本中C3含量。正常值为1.417±0.2396/L(X±SD)。

标准曲线的制备:在5个反应板微孑L中分别加入稀释抗C3血清158、156、154、152、150gL,再将C3含量标准品溶解后取2、4、6、8、10/ml分别加至相应各孔,最终体积各为160gul于微型混合器上振荡1min,置37℃水浴30min,取出后混匀,用酶标仪分别测定490nm吸光度。以C3含量为横坐标、吸光值为纵坐标,制成标准曲线。

补体其他成分也可用此法测定。

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