1、ELISPOT 分析中应该使用什么样子的吸头？

吸取细胞中，推荐使用开口较大的管尖，以减少剪切力，防止T细胞的凋亡。请尽量不要将管尖碰到膜。

2、有时候在培养皿底部有条纹和不规则的斑点出现。这是什么原因导致的？

在分析过程中，T细胞的移动活跃。特别的，在活体或者培养皿中，预先激活的T 细胞的迁移很快，常常留下细胞因子的痕迹。同时，如果板被震动（例如孵箱门的开关的撞击）或者在捕获中被移动了，则细胞会卷起，留下条纹或者不规则形状的斑点。

3、可以在孵箱中将板碓叠起来吗？

为了保证热量的均匀分布，我们不建议将板碓叠起来放置。

4、生长之后将板干燥的最好方法是什么？

最好的方法是将板倒置放于气流罩中过夜。请注意不要将它放置于37 °C以上的环境中干燥，否则膜有可能破裂。

5、干燥后的板可以保存多少时间？

在避光保存下，红板最长可以稳定保存5个月。蓝色分析的板则更稳定，但是我们建议一定要避免光照。

6、将T 细胞冰冻后仍然能用于ELISPOT 吗？

如果CTL 的方案中已经指明，或者在后面的步骤中使用了冰冻介质，人类PBMC 可以进行冰冻，不会造成功能上的损失。请发信至info@immunospot.com 以获得更多的信息。

7、CTL 提供分析方案吗？

是的。CTL 为单色和双色ELISPOT 分析提供解决方案。CTL 同时提供实验室培训和分析咨询业务。请直接与我们联系。

8、扫描和分析服务的时间是多久？

CTL 扫描服务的平均时间是2-3 天，最多不超过5 个工作日。同时提供24小时快速扫描评估业务。关于价格，请发信到下面的地址：info@immunospot.com.

9、CTL在提供扫描和分析ELISPOT 板服务的同时提供故障解决服务吗？

是的。CTL 一直乐于帮助客户提高ELISPOT 分析的性能。如果我们在ELISPOT 分析中观察到了问题，我们将乐于免费为客户提供解决问题的一系列方案。

10、可以举行双色分析吗？

是的。CTL 通过ImmunoSpot®双色分析软件，可以对双色孔进行分析，包括那些双反色斑点的情况。

11、可以使用普通邮寄方式发送板吗？

只有彻底坏了的板或者干燥过的板才真正适合普通邮寄方式。

12、谁来进行扫描和分析？

CTL 中经过训练的科学家将为您提供扫描和分析服务。

13、扫描和分析的结果最终将以什么样的方式提供？

你将收到每个孔的原始数据的扫描图像（（JPEG 和TIFF 格式）和数字结果（.txt 和Excel 文件）。另外，所有的计数参数和斑点志存分布将同时被记录。数据可以在internet 上下载，或者刻录成CD或者DVD邮寄给您。返回的数据包含完整的审核记录，使得透彻理解数据的如何获得。允许对数据进行重新生成和分析。

14、我能要回我的板吗？

当然。所有的板将随数据光盘一起返回到您手上。

15、我可以选择自己分析板吗？

可以。CTL 可以仅为您扫描板，然后将原始图像数据返回给您。您可以自己使用Immuno® 软件自己进行分析。

16、我可以自己扫描板吗？

当然，如果你购买的Immunospot 软件，我们可以为你扫描板，然后将数据返回给你。这种方式下，你可以进行所有的分析。

17、使用ImmunoSpot® Series 3A 分析仪可以对哪些板进行分析？

使用ImmunoSpot 3A 系列扫描仪，可以扫描所有格式的96孔板，包括透明板、浅体积板、剥脱的尼龙膜和打孔的PVDF 膜。更多疑问，请与我们联系：info@immunospot.com.

18、使用ImmunoSpot® 3 系列分析仪多少时间可以扫描一张板？

FastScan™ 功能通常在1 分钟内扫描完一整张板。更加精确的测量包括自动为每个孔调整最佳位置，以保证整个膜面积被扫描到，以及保证不规则膜扫描的准确性。使用这种自动聚焦模式，每个板大约需要4 分钟的时间。

19、使用ImmunoScan 扫描一张膜大约需要多少时间？

使用ImmunoScan 可以同时扫描四张膜。扫描完所有的膜大约需要10 分钟。

20、mmunoSpot® 3B系列的分析仪可以分析什么类型的板？

同ImmunoSpot® 3A系列分析仪一样，可以扫描所有的96 孔板。另外，3B系列分析仪的缩放功能允许扫描24 孔和48 孔的板。3B 分析仪可以定制后扫描12 孔和6 孔的板。详细情况，请联系：info@immunospot.com。

21、我们需要先消毒板吗？

典型的ELISPOT 分析包括最多1～2天的细胞培养。培养介质中抗体一般来说足以避免感染。尽管如此，使用消毒过的板依然是一个明智的防范措施。

22、我的细胞数目很少的时候怎么办？

在理想结果下，T 细胞和抗原呈递细胞需要在膜上形成一个单层。如果T 细胞有限（例如，检测来自分离固体器官的细胞或者组织活检材料）的情况下，一些数目的T 细胞会覆盖在APCs的单层上。如果两者都有限，CTL 推荐使用Whatman 制造的低体积板。作为另外一个选择，可以在U 型或者V 型底的板中活化培养，然后将细胞转移到ELISPOT 板上。 （吸取的时候要尽可能的轻柔，尽量减少转移过程中的剪切力） 我们可以帮您制定分析计划。请联系我们的科学家：info@immunospot.com.

23、CTL 推荐什么类型的膜？

一般来说，我们推荐PVDF 板。PVDF 膜上的不规则表面碎片和不易被水沾湿的特性对于连接被包被的抗体和培养基来说最为理想。更多类型的咨询，请联系：info@immunospot.com

24、分析仪中可以使用空白板吗？

是的。ImmunoSpot® 分析仪可以处理空白板。然而，一般来说，CTL 推荐使用不透明的板，因为它不透光或者因其遮光特性光线，因此可以避免光线的反射，避免对图像处理造成影响。

25、我目前使用琼脂糖板。这也可以进行分析吗？

ImmunoSpot 3A 和3B 都能处理琼脂糖覆盖的Elispot。然而，在琼脂糖中，斑点褪色很快，同时，琼脂糖对光线的折射使得分析过程可能需要更多的人工干预。

26、我可以使用ImmunoSpot® 系统分析空白底的板上的金色斑点吗？

3A 和3B 分析仪都能毫无问题地处理这种板。

27、经过消毒包装好的ELISPOT 板可以保存多少时间？

无覆盖的，经过消毒后包装好的PVDF 板，如果没有被破坏的话，可以保存数年。

28、覆盖过的湿板可以保存多少时间？

覆盖过的湿板在4°C 下可以稳定地保存一个星期。他们可以在干燥后保存更长的时间，但是根据抗体的不同，其稳定性有着相当大的区别。

29、显色后的板在高压蒸汽处理之后能重新使用吗？

不能。然而，只有在板的部分使用时，没有用过的孔才可以重新使用。（请使用抗体。它能保证1－2天的分析中的消毒保护）

30、ImmunoSpot® 分析仪可以用于双色分析吗？

答：可以。3A 和3B 系列的分析仪都支持单色和双色分析。3B 分析仪的光学部分和镜头部分特别增强，用于最高的色彩保真和解析度。

31、ImmunoSpot® 分析仪的图像解析度是多少？

3A 系列分析仪为512 x 512 pixels，3B 分析仪提供1024x1024 的解析度。如果需要，3B 系列可以为客户提供更高分辨率的解析度。

32、ImmunoSpot® 分析仪是如何保证一致性的照明？

ImmunoSpot® 分析仪使用已申请专利的发光机制，以保证所有的孔的底部都受到一致性的光照。使用不反射（不透明）和中性色彩（白色）的板会获得最好的结果。另外，3A 和3B 分析仪都有自动光线调整的选项，允许在多种背景下对光照进行精细的调节。

33、什么类型的分析需要最高的分辨率？

无论斑点的大小，使用最高分辨率能为斑点的形态学提供最多的信息，同时能在ImmunoSpot® 软件（SmartSpot™）中，增加高级斑点形态学识别的准确性。斑点的大小反应了每个细胞产生和分泌的动力学参数。另外，T 细胞刺激的强度也定义了斑点的大小。低亲和力的T 细胞识别结果则导致低产量和更小和更微弱的斑点。Granzyme B、TNF 和IL-10 分析常常产生小斑点。在上述的这些情况下，使用最高分辨率图像处理具有明确的优势。

34、扫描过程会产生多大的数据文件？

默认情况下，ImmunoSpot® 分析仪仅存储非损失的文件，使用TIF （Tagged Inline File Format，TIFF）） 的图像格式而非JPEG。 这是应为JPEG 压缩算法不可避免地会导致图像失真和信息丢失。在512 x 512 的分辨率下，每个孔的数据约660 KB；一张普通CD 数据光盘（约640M～700M）可以容纳10个板的数据，一张DVD 可以存储70 张板的数据。在1024 x 1024 分辨率下，CD 和DVD 分别存储4 张和30 张板的图像数据。

35、图像包括孔的底部吗？边缘会被切掉吗？

孔的图像包括整个孔的底部。得益于Immunospot 分析仪的自动居中功能，每个孔都会被智能软件算法自动居中。因此，Immunospot 分析仪会自动补偿在生产微孔板过程中形成的孔和孔之间的形状差异。

36、CTL 能提供关于GLP 和21 CFR part 11方面的专家意见吗？

是的。 我们承诺CTL 是唯一一个真正服从GLP 规则，提供高吞吐量ELSIPOT 测试的实体。CTL 是免疫耐受网（ Immune Tolerance Network）的指定实验室，专门从事临床试验检测工作。同时我们提供为制药/生物学公司提供合约服务。 CTL 为符合GLP 的ELISPOT 测试资质提供咨询服务。请与我们联系：info@immunospot.com Immunospot 系统是如何遵守21 CFR Part 11的？

37、Immunospot 系统是如何遵守21 CFR Part 11的？

Immunospot® 系统支持Part 11 守则，提供由编码器控制的高精度载物台、微孔检定系统以及数据获取的审查装置。禁止软件对扫描图像、斑点技术结果和质控结果发生重写错误，并且总是对现有数据进行标记时间的备份。为了保护数据安全，同时记录操作者的ID 号码和每个孔的编码位置。 另外，Immunospot® 提供检测改动过的ELISPOT 数据的能力，以保证数据的完整性。使用Windows XP 文件权限系统，确保系统数据文件的访问权限，并且管理方便。 基于确认和校准的目的，CTL 提供咨询服务和技术文档，以促进客户的评估过程。CTL 同时为客户提供量体裁衣的解决方案，以促进客户在ELISPOT分析方面的研究和应用。