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磁珠分选细胞注意事项

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磁珠分选细胞注意事项

1、待分选细胞中如有贴壁细胞,建议在分选前先贴壁培养去除,或者提高EDTA浓度。

2、抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合。因而分选前去除死细胞。

3、新鲜分离骨髓细胞,先用胶原酶、DNA酶、胰酶联合消化,可使细胞团块解聚,从而提高分离效率。

4、上分离柱前,充分振荡,混悬细胞,打散细胞团块。

5、用分离柱分选,应用真空抽滤水,减少水中气泡,使分离柱不被气泡阻滞。

6、细胞悬液加入分离柱中时,应将滴管伸至底壁后加入,避免将细悬液沿管壁流入,使管壁残流末分选细胞,以致后继洗柱过程中,因疏忽末被洗下,最后导致纯度不高。洗柱时,应在前次液体充分流尽后,再加洗液。

7、分选细胞量应根据说明书控制,不超量。

8、孵育时间和温度应按说明书进行,延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合。

9、先用抗体阻断Fc受体,可降低非特异性结合。

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