一、革兰氏阳性细菌,转化过程的几个阶段: 1.细菌感受态的形成 由于分泌一种称为感受态因子的小蛋白而导致细菌感受态的形成。 2.转化因子的吸收 双链DNA片段与感受态受体菌的细胞表面特定位点结合,并激活临近的核酸酶。DNA双链中的一条单链逐步降解,同时另一条单链逐步进入细胞。 3.整合复合物前体的形成 一种特殊蛋白与单链DNA结合,有效保护单链DNA免遭核酸酶的降解,并将其引导至受体菌染色体DNA处。 4.单链DNA转化因子的整合 转化DNA单链可以通过同源重组,置换受体细胞染色体DNA的同源区,形成异源杂合双链DNA结构。 5.转化子的形成 受体菌染色体组进行复制,杂合区段亦半保留复制,当细胞分裂后,此染色体发生分离,于是新形成一个转化子。 二、影响转化的因素 1.DNA能否进入细胞; 2.DNA进入细胞后的稳定性; 3.质粒DNA的大小,大质粒的转化效率低于小质粒,到目前,大于30kb的质粒,转化效率仍很低; 4.DNA的浓度、纯度和形状; 5.诱导感受态细菌所用的离子的种类和浓度; 6.热休克时间的长短及平板培养条件等。 |
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