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过夜菌液(overnight suspension culture)之培养

标签: 过夜菌液 培养

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仪器用具:

酒精灯

接种环

药品试剂:

E. coli 菌株 (JM109)

LB 培养液:

1% (w/v) Bacto tryptone, 0.5% Bacto yeast extract, 1% NaCl,以5 N NaOH 调至pH 7.0 后,以湿热法灭菌。

LB agar plates: LB 培养液中添加1.5% (w/v) Bacto agar.

方法步骤:

1) 每组应有一支15 mL 试管,装有2 mL LB 培养液,请写上JM109,并标明组别及日期。

2) 将接种环在酒精灯火焰上烧红,环上方部份亦以火焰烧过。使接种环冷却并刮下菌落,将培养皿盖子置回。

3) 打开试管盖 (一手握住试管,并以拿着接种环那只手的小指旋开盖子),将管口在酒精灯上过火。将沾有菌落的接种环伸入培养液中并轻敲管壁使菌落脱离。将管口再次在酒精灯上过火后,将盖子置回。

4) 将接种环在火焰上烧红灭菌后置回实验桌上。

5) 将试管的盖子稍微旋开,并以胶带固定管盖,以免震荡培养时盖子松动掉落。

6) 将试管置于37℃培养箱或水浴中震荡培养过夜。

7) 将长有JM109 之培养皿交回给助教。

◆ 与细菌接触过的任何容器或培养基,使用后须经过灭菌才可丢弃。 实验中若不小心被菌液溅到,马上用大量清水冲洗,并以70%酒精消毒。桌面或地面有菌液翻覆时,须以10%漂白水擦拭清理。

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