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支原体培养

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支原体常用培养基为PPLO,很多公司都有出售.但血清(常用马血清或猪血清)和抗生素(醋酸跎)你要自己加.你可以查查.还有改良的Frey's培养基,常用的微生物实验技术书上都可以查到的。可以自己配制的。在液体培养基中通常要加入酚红做指示剂的,当培养基由红色变为黄色时,即可判定支原体的生长程度。要强调一点,支原体的分离可能不太容易,那么要多盲传几代。液体培养基变黄后,在固体培养基上单克隆,以纯化分离的菌。

据生命经纬网友 xwfxwf401 所有解脲,人型,肺炎,生殖道支原体培养基,均为液态,不知道homiao要分离哪种支原体,需要哪种支原体?

1、培养:支原体的培养37℃即可,当然,初次培养37℃,5%-10%co2效果更好。其中,解脲支原体生长比较快,用我所培养基,接种量104- 105ccu,培养16-18h即可达到对数生长期。人型,肺炎,24-48h即可达到对数生长期。

2、鉴定:主要靠菌落染色、生化反应及特异性生长抑制试验等.

(1)Dienes菌落染色
  Dienes染色液:
  美蓝 2.5g
  天青-Ⅱ 1.5g
  麦芽糖 10g
  碳酸钠 0.5g
  蒸馏水 100ml

染色时,直接吸染色液覆盖菌落,1min后,用生理盐水洗去染色液,低倍镜下可见支原体菌落呈蓝色,而其他菌菌落不着色。

(2)生化反应

根据不同采样部位及对底物的分解或者作为能源,可以鉴别不同支原体。

解脲支原 分解尿素不分解精氨酸,生成NH3使培养基的ph升高,酚红指示剂变红。

人型支原体分解L-精氨酸不分解尿素,生成NH3使PH值升高,酚红指示剂变红。

肺炎和人型支原体分解葡萄糖,使pH降低,酚红指示剂由红变黄。

(3)在含0.002%美蓝的培养基中肺炎支原体能生长且将美蓝还原而退色,其他口腔、唾液或发酵支原体均被抑制生长,此法可鉴定肺炎支原体。

(4)分子生物学鉴定

由于支原体的基因文库已建立,通过pcr扩增和基因探针技术可以对支原体进行鉴定。

如果要自己配制培养基,现提供几种配方:

基础培养基:Hayflick培养基(PPLO培养基),牛心粉 50g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 加14g琼脂粉为固体培养基

(1) 肺炎支原体培养基

基础培养基 70ml
  牛血清 (灭活) 20ml
  25%的酵母浸液 10ml
  50%葡萄糖 1-2ml 0.4
  酚红 0.5ml
  制霉素 0.001g
  青霉素 10万IU
  pH 7.8

(2)人型支原体培养基

基础培养基 70ml
  马血清 20ml 25%的酵母浸液 10ml
  30%L-精氨酸 0.33ml
  0.4%酚红 0.5ml
  制霉素 0.001g
  青霉素 10万IU
  pH 6.3

(3)解脲支原体培养基

基础培养基 70ml
  马血清 20ml
  25%的酵母浸液 10ml
  30%尿素0.33ml
  0.4%酚红 0.5ml
  制霉素 0.001g
  青霉素 10万IU
  pH 6.0

注:由于支原体能在人工培养基上生长,但是营养要求较高,需要提供胆 固醇和酵母才能生长。以上配方中,马(牛).血清提供胆固醇,酵母浸液提供酵母。

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