结核杆菌的培养基的配制 网友ljksbs给出结核杆菌培养基配制的方法: 结核杆菌培养采用罗-琴培养基,为防止培养基干裂,可加入适量甘油,我们是在1600ml的培养基中加入甘油12ml。 罗-琴培养基成分: 具体配制方法如下: 结合杆菌的计数 网友benrong给出计数方案: 结核菌生长缓慢且难于培养,不适于用平板培养,一是易污染环境,二是培养时间长了,平板会很快干掉。因此结核菌的cfu测定不能象大肠菌那样采用平板菌落计数法。一般很少有人做结核菌的cfu计数,如果一定要做,可用Middlebrook7H9液体培养基依次稀释,再接种于罗氏斜面培养基或Middlebrook7H10,计数可见到单菌落的培养斜面上的菌落数,计算出cfu。 一般斜面面积可达4~5平方厘米,只要稀释菌液中的活菌数足够少,就肯定可得到可目测出的单菌落数(n)。假设每个稀释度菌液的体积为v1,接种体积为V2,则cfu/ml=n×V1×稀释倍数/V2. 已培养出的结核菌菌落,可用一玻璃试管,加几颗玻璃珠,1ml生理盐水,一起高压蒸汽灭菌。然后,挑取菌落到此试管中,振摇以获得均匀菌悬液,再稀释成所需麦氏浊度。还可将已分纯的细菌接种到7H9肉汤培养基培养,待菌生长后再根据你的需要稀释成一定麦氏浊度的菌液。因Middlebrook 7H9 brooth添加了OADC及吐温-80,不但营养丰富,而且细菌可呈均匀生长。 网友tb9981认为: 结核菌与一般细菌不一样,容易形成菌团,接种前应研磨均匀,制备1mg/ml菌悬液后用10倍稀释,如果没经验,多接几个稀释度,每个稀释度最少3支,每支接种0.1ml,计算最后长满的不计算,可计数稀释度菌落就可以,一般合格培养基培养每毫克结核杆菌约1-2千万活菌。 如果第1次做,可以拿卡介苗(0.5mg/支)当对照(2-10百万cfu/mg),以确定你实验方法无误。 |
词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
1