简单染色通常只用一种染色剂,使细菌整个细胞染上颜色。但看不清结构。所以只便于检查细菌的形态、大小和排列方式等。 【实验目的】 1、掌握单染色的操作技术 2、观察细菌的基本形态 【实验原理】 单染色即用单纯的种染料进行染色,多数采用美蓝、结晶紫或石碳酸复红等碱性染料。此法仅能显示细胞的外部形态,而不能辨别其内部结构。 染色前必须将细胞固定,其目的是杀死细菌,并使它粘附在载玻片上。此外,还可以增加菌体对染料的亲和力。常用的有加热和化学固定两种方法。无论用哪种方法都应尽量使细菌维持原有的形态,防止细胞膨胀或收缩。 【实验材料、药品及器具】 1、菌种 大肠杆菌(Escherichia coli) 枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis) 2、染色液 石炭酸品红染色或结晶紫染色液(Stining Solutions) 3、无菌水 4、洗瓶装蒸馏水 5、洗净的载玻片(Slicle)5片 6、显微镜、香柏油、接种环、酒精灯、擦镜纸、吸水纸、二甲苯 【实验步骤】 1、涂片:取一片干净无油载玻片,在其中央滴一滴无菌水,然后用接种环以无菌操作方法取少许培养好的大肠杆菌,放在载玻片的水滴中涂匀,注意菌量不宜过多,否则,不易看清单个菌体。 2、固定:将涂好的玻片在空气中风干或火焰上通过3~4次,使水份蒸发,此时细菌菌体紧贴在玻片上。 3、染色:用石炭酸品红或结晶紫染色剂30~60S,然后用洗瓶轻轻冲洗染色剂(注意不要直接冲洗染色部位),直至无多余的染液,晾干或用吸水纸从旁吸干或用微火烘干。 4、用同样方法将枯草芽孢杆菌制作一张涂片。 5、镜检:首先在低倍镜下找到物像,然后在涂膜中央滴一滴香柏油,换成油浸镜观察两个菌种的形态和排列。 6、去除油镜上的香柏油:先用干净的擦镜纸擦2-3次,再换另一张擦镜纸蘸取少许二甲苯以除去残留的香柏油,最后用擦镜纸擦干。擦镜头时应顺着镜头直径方向擦,不要沿着圆周方向擦。 |
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