准备工作

1． 毛细管的制备：

①  剪略长于需要长度的毛细管（使用专用的裁剪纱布），断端利用镊子小心移除。

②   烧窗：从毛细管进液端开始到实验者需要长度的位置烧窗，窗口尽量小，过程中可用防护工具对窗口两端的毛细管进行防护，烧好的窗需用粘有酒精的棉花擦拭。

注：检测的有效长度为从毛细管进液端到检测窗之间的距离，这个距离一般根据实验者的需要自己掌握。

③   取出卡槽：打开安放卡槽区域的门，旋转固定卡槽的杠杆90度，按卡槽中央的释放按钮，握住卡槽的两端向上抽出卡槽。

④   安装毛细管：将进液端的毛细管小心的从卡槽的出口插入，进入时可轻轻旋转。当窗口到达检测点时停止插入，将游离的进液端毛细管从卡槽的入口引出，并固定好毛细管外端的橡胶管。

注：插入毛细管时小心操作，窗口位置的毛细管非常容易破裂，需格外谨慎，过程中切忌使用暴力。

⑤  安放卡槽：用与取出的步骤相反顺序的操作安放卡槽。

2．  添加样品，缓冲液及冲洗液：

①  为了减少样品及缓冲液的挥发，在插入加液管前可在加样管固定器的小孔内加入少量的ddH₂O。

②  已添加好的加液管，在插入转盘上的固定槽前先离心2min，加液时注意加样枪头紧贴管壁，防止气泡的产生。

③  为了减少虹吸作用，需要保持入口处和出口处的running buffer量一致，对于500ul体积的加液管，推荐加入500ul的剂量；对1.5ml体积的加液管，推荐1.3ml的剂量。

④  推荐加入样品的最小剂量为50ul，检测需要的最小剂量为15ul。

⑤  在出口处的waste管中加入50ul的ddH₂O，可以防止检测端的毛细管被冲洗液的残留污染。

电泳仪的操作

1． 插上电源，检查电泳仪的连接情况，检查制冷区小槽内水量是否充足，打开电脑，打开电泳仪的开关（两扇门都需要关闭），在电脑桌面点开BioFocus的图标，进入到BioFocus的控制界面。

2． 设置程序：

①  点击Reagents键，在已有的Reagents Data Base中查看是否含有需要使用的配液，有可点击该配液查看，或使用edit键进行修改；没有则点击add进行编辑添加。添加之后注意命名名称的唯一性。

②  点击Cartridges键，对卡槽的相关参数进行查看，修改。如Cartridges Data Base中没有和试验要求匹配的配置参数则点击Add进行添加。注意需要激活相应的或者设置的卡槽。

③  点击Configurations→Define添加需要的信息：configuration ID；Configuration description；select the cartridge→Continue：Regent双击左下角regent data base中需要选择的regent，双击屏幕右边你需要放置该regent的Inlet Carousel Position→Sample：命名，同样的方式从左下角的Reagents中添加到右侧相应的位置上→点击empty，然后点击需要删除的Regent；点击clear，清除所有设置的Regent摆放次序→OK。

注：在以上几步中，记得同时设置好中止的清洗程序，及Shutdown程序，ddH₂O清洗5分钟，氮气吹干。

④  点击Methods：选择设置好的程序→Define：填写Method ID，Description→Inlet Regent ，选择电泳中需要的Running buffer →Outlet Regent ，选择电泳中需要的Running buffer→Voltage Mode填写需要的电压，电流， 正负极，设定电泳时毛细管需要的温度，以及电泳时间→Add：添加在电泳前后需要灌注的洗液等，填写灌注的时间→Injection：选择电压或者气压的进液方式；前者需选择恒压或者恒流，以及进液时间的长短；后者需选择压力*时间的进液常数→Detector：Detector Parameters：设置波长，时间，通道，AU范围；Display parameters：设置波长，AU范围，偏移；Options：设置Rise Time，Turn off lamp at run end；Designation：该设者存储的位置→OK。

⑤  点击Auto Seqs：选择需要的程序→Define查看，编辑需要调整的程序，如States显示Conflict则需要对相应的设置进行调整，直到状态显示Pending →Pending， Ready →OK→Start。

停止，存储，查看文件

 等待所有的程序完成后（包括运行程序及情节程序），要停止运行的程序，则可点击屏幕左上角的Stop键→选择需要中止运行的某一步（Abort Current Run Only），某一组（Abort Current Run Group）或所有编辑的程序（Abort Automation Sequence）→OK→存储在指定盘上（Yes），自定义盘（NO）→需要取出加液管及转盘（YES），不需要（NO）。

注：在所有的对话框消失之前，以及转盘没有回到初始位置之前，不能打开电泳仪的门。

操作要点

1. 将毛细管电泳仪放置于有空调的房间，保持室温恒定。同时，操作中控制毛细管及仪器恒温。

2. 缓冲液加压一段时间后，淌度和电渗流会变化，要经常更换。

3. 缓冲液要用0.45mm微孔滤膜过滤后使用。

4. 对未涂渍的毛细管柱每天使用前先用0.1mol/L氢氧化钠溶液、水及运行缓冲液各冲洗10min平衡后使用。更换缓冲液时，要用水冲洗3min后，再用缓冲液冲洗10min平衡后进样。

5. 样品宜溶于稀释5～10倍的运行缓冲液中，以获得好的峰形。

6. 为提高定量准确性，宜加入一内标。在保证峰形的前提下，样品宜用高浓度，进样时间应大于5psi×sec。

7. 摸索实验条件时，可先用一短柱，用磷酸盐、硼砂或Tris在不同的pH值条件下试验，当选定缓冲液种类时，可先改变pH值获得最佳分离，再改变浓度以获得较好的峰形及柱效。为使分析高效、快速，电压一般可用18～20kv。

8.每次作完实验后，用水冲洗5min，可将毛细管两端置于水中保存，也可用氮气吹干后保存。